氯乙烯對大鼠肝細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 通過研究氯乙烯單體(vinyl chloride monomer，VCM)對大鼠肝細(xì)胞P53介導(dǎo)的細(xì)胞周期G1/S關(guān)卡的影響和相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，以期探索VCM可能的致癌機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 將64只SD大鼠隨機(jī)分成4組，分別為5、25、125mg/kg體重3個(gè)染毒組和對照組，對照組為同中劑量染毒組相同體積的清潔空氣，采用腹腔注射染毒，每周3次，持續(xù)12周。實(shí)驗(yàn)過程中記錄大鼠的一般情況。

2、染毒6周和12周分別隨機(jī)處死32只大鼠(雌雄各半)，流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠肝細(xì)胞周期和凋亡，Western blot檢測肝細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(正性調(diào)控cyclinA、cyclinD1和負(fù)性調(diào)控P53、P21)的表達(dá)，免疫組織化學(xué)法檢測CDK4、P16蛋白表達(dá)的變化。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠的一般狀況在染毒過程中大鼠未發(fā)現(xiàn)明顯中毒癥狀，體重正常增加，4組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

3、P＞0.05)。
　　 2.大鼠染毒6周后，大鼠肝細(xì)胞G0/G1期分布差異P=0.055，各染毒組的G0/G1期分布百分比均高于對照組。染毒12周時(shí)，S期細(xì)胞百分比隨著染毒劑量的增加而增加(P=0.016)。
　　 3.VCM對大鼠染毒6周后，大鼠肝細(xì)胞P21蛋白表達(dá)量隨染毒劑量的增加而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，P53蛋白表達(dá)量隨染毒劑量的增加而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，cyclinA和cyc

4、linD1蛋白表達(dá)量均隨染毒劑量的增加而增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　 4.VCM對大鼠染毒12周后，P21蛋白的表達(dá)量隨染毒劑量的增加而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，中、高劑量組P21蛋白表達(dá)量高于對照組，高劑量組高于低劑量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); P53蛋白的表達(dá)量隨染毒劑量的增加呈上升趨勢，高劑量組高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但總體差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.

5、05)。cyclinA和cyclinD1蛋白表達(dá)量隨染毒劑量增加而增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中高劑量組表達(dá)量高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。
　　 5.免疫組化法檢測VCM染毒12周，P16蛋白表達(dá)量各組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，CDK4蛋白表達(dá)量隨染毒劑量的增加呈降低趨勢，染毒組的蛋白表達(dá)量均較對照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6.組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)VC

6、M染毒后，對照組和低劑量組肝細(xì)胞形態(tài)基本無變化，中劑量和高劑量組肝細(xì)胞有氣球樣變，匯管區(qū)變大，纖維化等病理改變。
　　 結(jié)論：
　　 1.VCM在低劑量早期暴露時(shí)，能夠影響細(xì)胞周期分布，引起G0/G1期阻滯，隨著染毒劑量的增加和染毒時(shí)間的延長G1期阻滯消失，發(fā)生S期阻滯。
　　 2.VCM染毒對大鼠肝細(xì)胞早期凋亡有影響，對晚期凋亡的影響不大。
　　 3.cyclin A、cyclinD1和P21蛋白的過表