CK13基因5’旁側(cè)的功能研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文CK13基因5’旁側(cè)的功能研究姓名：林功標(biāo)申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：肖健云2002.1.1博士學(xué)位論文中文擅要CKl3基因5’旁側(cè)的麟研究CKl3基因5’旁側(cè)的功能研究(摘要)博士生：林功標(biāo)導(dǎo)師：肖健云教授CKl3基因是粘膜非角化復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞終末分化的標(biāo)志。影響CKl3基因表達(dá)的因素勢必影響上皮細(xì)胞的分化，所以對CKl3基因表達(dá)調(diào)控的研究可以加深對上皮細(xì)胞分化的認(rèn)識，同時也有助于對上皮性腫瘤異

2、常分化原因的認(rèn)識。廠＼(CKl3基因通常只表達(dá)在非角化復(fù)層鱗狀上皮的淺層，如：鼻咽、舌、食道及會厭等，在泌尿系移行上皮從基底層到淺層都表達(dá)CKl3基因；但這些部位的腫瘤，CKl3基因多表達(dá)異常。CKl3基因的這種表達(dá)特性與其5’旁側(cè)轉(zhuǎn)錄活性有無密切關(guān)系，目前并不清楚。為此，我們采用分子克隆及報(bào)告基因分析的方法，構(gòu)建CKl3基因5’旁側(cè)513bp的氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶報(bào)告基因載體，通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)導(dǎo)入不同的組織細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞，檢測這些

3、細(xì)胞中CKl3基因5’旁側(cè)報(bào)告基因載體氮霉索乙酰轉(zhuǎn)移酶的相對活性；同時采用hortherablot的方法檢測這些細(xì)胞中CKl3基因的表達(dá)情況，首次對CKl3基因組織特異性表達(dá)及上皮性腫瘤中CKl3基因異常表達(dá)與其5’旁側(cè)轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)系進(jìn)行了探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同類型的組織細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞中CKl3基因5’旁側(cè)報(bào)告基因的活性不一，表達(dá)與不表達(dá)CKl3基因的組織細(xì)胞及腫0細(xì)胞中CKl3基因5’旁側(cè)氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶的相對活性有明顯差異，表達(dá)CKl3

4、基因的組織細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞中CKl3基因5’旁側(cè)氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶報(bào)告基因的相對活性明顯地高于不表達(dá)CKl3基因的細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有明顯差異。所以我們認(rèn)為CKl3基因組織特異性表述及匕皮性腫瘸中CKl3基因異常表達(dá)與其5’旁側(cè)的轉(zhuǎn)錄活性有關(guān)為了進(jìn)一步探討CKl3基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制，研究CKl3基因5’旁側(cè)不同模塊對其轉(zhuǎn)錄活性的影響及在CKl3基因組織特異性表達(dá)中的作用。我們采用分子克隆技術(shù)結(jié)合報(bào)告基因分析的方法，首次構(gòu)建了CKl3基因5’旁