果蠅Dnop5和Dxl6基因功能的初步研究.pdf

1、mRNA前體的選擇性剪接發(fā)生頻率很高，它在人類基因組中廣泛存在，是增加蛋白質(zhì)多樣性及基因表達(dá)復(fù)雜程度的主要原因。近來研究顯示，一類富含絲氨酸和精氨酸的蛋白(SR蛋白)對(duì)于剪接的順利完成有著至關(guān)重要的作用。SR蛋白是具有幫助識(shí)別正確剪接位點(diǎn)并促進(jìn)剪接體的成熟的一類重要剪接因子，為組成性剪接所必需，在選擇性剪接中更具有不可替代的作用。 Dxl6 基因是2000年克隆的一種編碼新基因。根據(jù)其氨基酸序列特點(diǎn)分析，它可能為SR蛋白家族的成

2、員，參與剪接過程。原位雜交顯示，Dxl6基因主要在果蠅胚胎后期的神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)，與神經(jīng)發(fā)育相關(guān)。Dxl6基因由兩個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子組成，其內(nèi)含子編碼另一蛋白DNop5。DNop5是Nop5/Sik1家族中的一員，這一家族成員主要參與小核糖體蛋白復(fù)合物的組成。原位雜交顯示：DNop5 在果蠅胚胎期表達(dá)集中在中胚層，亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核。為了研究Dxl6和Dnop5基因的功能我們購買了兩株P(guān)因子插入的果蠅：K00230和K00213，P因子

3、均插在Dxl6和Dnop5之間，但K00230中P因子靠近Dnop5基因，而K00213的P因子靠近Dxl6基因。這兩株突變的果蠅表型非常相似，均在三齡幼蟲或蛹期致死，少數(shù)逃逸者也有背部剛毛、翅膀、腿、眼睛發(fā)育的異常。Northern和Western blot結(jié)果顯示：這兩株突變的果蠅中Dxl6和Dnop5基因的表達(dá)均有所下降。 在本論文中，首先，制備了特異性的抗 DNop5多克隆抗體并用該抗體檢測了果蠅體內(nèi)DNop5 的表達(dá)情

4、況，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供了較好的工具。 其次，構(gòu)建了 DXl6 和 DNop5 過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因果蠅以及 DXl6 和 DNop5 的 RNAi 轉(zhuǎn)基因果蠅，通過UAS/GAL4系統(tǒng)在特定的組織過表達(dá)或抑制 DXl6 和 DNop5 來觀察果蠅的表型。結(jié)果表明，在果蠅全身過表達(dá)DNop5時(shí)，沒有引起明顯的表型缺陷；但DNop5在果蠅體內(nèi)表達(dá)水平的降低可以導(dǎo)致在蛹期之前死亡或剛毛的異常，DXl6 的過表達(dá)也出現(xiàn)果蠅致死的現(xiàn)象。