文冠果殼苷體外抗腫瘤活性及抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf

1、本論文主要研究了文冠果殼苷體外抗腫瘤活性,并初步探討了其抑制人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞增殖的機(jī)制。通過MTT法考察了文冠果殼苷對腫瘤細(xì)胞和正常人外周血淋巴細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　 采用吖啶橙(AO)和溴化乙啶(EB)雙染法考察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。通過流式細(xì)胞術(shù)分析藥物對MCF-7細(xì)胞體積的影響。通過DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測文冠果殼苷對MCF-7細(xì)胞的DNA損傷作用。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測了文冠果殼苷對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞周期分

2、布的影響。
　　 通過流式細(xì)胞術(shù)檢測了藥物引起的MCF-7細(xì)胞線粒體膜電位的變化。通過使用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)檢測文冠果殼苷對MCF-7細(xì)胞氧化應(yīng)激系統(tǒng)的影響。通過使用細(xì)胞壞死抑制劑necrostatin—1檢測文冠果殼苷對MCF-7細(xì)胞增殖抑制作用的影響。結(jié)果表明:文冠果殼苷對多種腫瘤細(xì)胞系均有抑制細(xì)胞增殖的作用,對不同腫瘤細(xì)胞的IC50值分別為5.10μM(HepG-2)、4.07μM(SGC-7901)、3.

3、64μM(A375-S2)、4.56μM(A431)和4.2μM(MCF-7)。文冠果殼苷在明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖的劑量范圍內(nèi),對人外周血淋巴細(xì)胞未見增殖抑制作用。9μM文冠果殼苷與MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)0h、3h、6h、9h、12h后,熒光顯微鏡下觀察AO/EB染色的MCF-7細(xì)胞,細(xì)胞質(zhì)有空泡產(chǎn)生,但未見細(xì)胞核染色質(zhì)固縮。9μM文冠果殼苷與MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)6h、9h、12h后,細(xì)胞體積變大。9μM文冠果殼苷與MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)0h、3h

4、、6h、9h、12h后,瓊脂糖凝膠電泳后DNA電泳呈明顯的彌散性條帶。此外,文冠果殼苷9μM作用MCF-7細(xì)胞24小時使細(xì)胞周期停滯在G1期。提示9μM文冠果殼苷處理MCF-7細(xì)胞后可能引起MCF-7細(xì)胞壞死。9μM文冠果殼苷與MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)6h、9h、12h后,引起MCF-7細(xì)胞線粒體膜電位下降。NAC可減弱9μM文冠果殼苷的細(xì)胞增殖抑制作用。不同濃度的細(xì)胞壞死抑制劑necrostatin-1(2.5、5、10、20和40μM)對