antagomir-155治療EAMG的免疫調(diào)控作用研究.pdf

1、目的:建立實驗性自身免疫性重癥肌無力(Experimentalautoimmune myasthenia gravis EAMG)小鼠模型，觀察antagomiR-155治療對B細胞活化、增殖及抗體分泌的影響，探討antagomiR-155治療EAMG小鼠可能的作用機制。
　　方法:采用電鰻乙酰膽堿受體(Torpede AchR，T-AchR)片段97-116免疫6-8周齡C57BL/6小鼠建立MG模型，初次免疫后第30、60天時

2、加強免疫，70 d時作模型評價。將EAMG小鼠隨機分為PBS組、對照組和AntagomiR155治療組。對照組給予antagomiR-155結構相似的無意義片段鏈，antagomiR-155組給予antagomiR-155作為治療。治療后第5天收集小鼠外周血、脾臟，免疫磁珠分選技術分選出T、B淋巴細胞，生物熒光染料CFSE法標記并流式細胞術檢測淋巴細胞增殖反應，流式細胞術測定記憶性B細胞、漿細胞的比例及B細胞表面活化分子CD40、CD8

3、0及CD86表達水平變化。ELISA法檢測小鼠外周血清抗AChR抗體IgG及其亞型IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3分泌水平。熒光定量RT-PCR檢測轉錄因子p38MAPK和轉錄因子C/EBPβ表達水平的變化。
　　結果:(1)與PBS組及對照組相比，antagomiR-155組小鼠外周血中IgG、IgG1的分泌水平顯著降低(P＜0.001)，三組小鼠IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3抗體分泌水平差異

4、無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　(2)與PBS組及對照組相比，antagomiR-155組小鼠脾臟漿細胞及記憶性B細胞的陽性表達率降低(P=0.029，P＜0.001)。PBS組與對照組的小鼠脾臟漿細胞及記憶性B細胞陽性表達率無顯著差異。
　　(3) antagomiR-155組小鼠較PBS組及對照組的CD40、CD86表達水平顯著升高;三組間CD80的表達水平無顯著差異。
　　(4) T-AchR、乙酰膽堿受體片

5、段R97-116刺激后，antagomiR-155組較PBS組及對照組B細胞的增殖反應顯著減弱，具有統(tǒng)計學差異;刀豆蛋白ConA刺激后各組均發(fā)生了增殖反應，三組間比較無顯著差異;血清培養(yǎng)后B細胞各組均未發(fā)生增殖反應，三組間比較無顯著差異。
　　(5) antagomiR-155治療組較PBS組及對照組的p38MAPK表達水平顯著低(P＜0.001)，C/EBPβ表達水平在各組間無明顯差異(P＞0.05)。
　　結論:anta