氨氯地平經(jīng)NF-κB通路下調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PDGF-B的表達(dá).pdf

1、一、PDGF-B在ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的改變
　　目的:通過(guò)氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，觀察隨著ox-LDL濃度和時(shí)間的變化，PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)改變。
　　方法:實(shí)驗(yàn)采用不同濃度（0，25，50，100 mg/L）ox-LDL與HUVEC-12內(nèi)皮細(xì)胞共同孵育24h，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫印跡(Western blot)分別檢測(cè) PDGF-B

2、 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)改變；然后選擇50 mg/L ox-LDL與HUVEC-12細(xì)胞孵育不同時(shí)間（0，3，6，12，24h）后，同樣用RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)改變；篩選出ox-LDL對(duì)PDGF-B表達(dá)影響適宜的處理濃度與時(shí)間。
　　結(jié)果:隨ox-LDL濃度增加，PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)趨勢(shì)一致，先逐漸上調(diào)，當(dāng)濃度為50 mg/L時(shí)，表達(dá)水平達(dá)峰值，但當(dāng)濃度為

3、100 mg/L時(shí)，表達(dá)下降。結(jié)合文獻(xiàn)和我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以下選擇ox-LDL的處理濃度為50 mg/L。隨著ox-LDL處理時(shí)間的延長(zhǎng)，PDGF-BmRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)逐漸增加，在24h時(shí)，達(dá)最大值。因此在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中選擇50mg/L ox-LDL刺激HUVEC-12內(nèi)皮細(xì)胞24小時(shí)，作為促進(jìn)PDGF-B表達(dá)明顯上調(diào)的最適濃度與時(shí)間。
　　結(jié)論: Ox-LDL可影響HUVEC-12內(nèi)皮細(xì)胞中PDGF-B的表達(dá)
　　二、氨氯地

4、平對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PDGF-B和NF-κB表達(dá)的影響
　　目的:觀察不同濃度（0，0.1，1.0，10.0μM）氨氯地平對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中PDGF-B和NF-κB的表達(dá)改變。
　　方法:在第一部分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，我們選擇ox-LDL的處理濃度與時(shí)間分別為50 mg/L和24小時(shí)，實(shí)驗(yàn)分為5組：對(duì)照組、ox-LDL組、（0.1，1.0，10.0μM）氨氯地平預(yù)先處理細(xì)胞30min后加入50

5、mg/L ox-LDL共同孵育24小時(shí)組。用RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)及NF-κB的蛋白表達(dá)改變；篩選出氨氯地平影響PDGF-B及NF-κB表達(dá)的適宜濃度。
　　結(jié)果:隨著氨氯地平濃度增加，細(xì)胞PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)及NF-κB的蛋白表達(dá)均逐漸減少，并呈現(xiàn)濃度依賴性，當(dāng)濃度為10.0μM時(shí)作用更明顯。
　　結(jié)論:氨氯地平可下調(diào)ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC-

6、12內(nèi)皮細(xì)胞中PDGF-B和NF-κB的表達(dá)。
　　三、氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PDGF-B和NF-κB表達(dá)的影響
　　目的:觀察氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PDGF-B和NF-κB表達(dá)的影響，以分析氨氯地平通過(guò)NF-κB通路對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PDGF-B表達(dá)的作用。<

7、br>　　方法:在第二部分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選擇10.0μM氨氯地平和20μM PDTC分別預(yù)孵育HUVEC-12內(nèi)皮細(xì)胞30min，再與ox-LDL共同孵育24h，共分為六組：對(duì)照組、ox-LDL組、PDTC+ox-LDL組、氨氯地平+ox-LDL組和PDTC、氨氯地平單獨(dú)處理組， RT-PCR和ELISA分別檢測(cè)細(xì)胞PDGF-B的mRNA和蛋白表達(dá)， Western blot與免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞NF-κBp65的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)