αB-晶體蛋白的核輸出信號預測及定位.pdf

1、αB-crystallin(CRYAB基因的蛋白產(chǎn)物) 是最重要的晶狀體結(jié)構(gòu)組成蛋白之一，和其它晶狀體蛋白一起組成晶狀體。先天性白內(nèi)障患者中至少有三分之一明確與白內(nèi)障致病基因的突變有關，約有一半白內(nèi)障病人，是由于晶體蛋白基因突變引起的。在晶狀體中，αB-crystallin發(fā)揮重要作用，它維持著晶狀體的透明；屬于小分子熱休克蛋白超家族成員，在體內(nèi)具有分子伴侶的功能，可防止晶狀體細胞內(nèi)其它蛋白質(zhì)的聚集，從而維持這些蛋白的正常功能；該蛋白參

2、與應激反應，可被熱休克、輻射、缺氧以及一些藥物激活，起到抑制細胞凋亡的作用；αB的突變可能引起心臟疾病，神經(jīng)肌肉疾病。 在αB-crystallin執(zhí)行生理功能的過程中，該蛋白可以動態(tài)地進入和輸出細胞核。CRYAB在核轉(zhuǎn)位過程中，一方面依賴CRYAB蛋白本身所固有的核輸出信號，另一方面需要其它核轉(zhuǎn)運受體蛋白的協(xié)同參與?；谶@一分析，我們對CRYAB進行結(jié)構(gòu)域搜索，發(fā)現(xiàn)CRYAB的68－81位氨基酸可能具有核輸出信號序列(Necl

3、ear Exprot Signal)的特征。 本課題構(gòu)建綠色熒光蛋白(GFP)和CRYAB融合蛋白，并通過定點突變，產(chǎn)生各種αB-crystallin的突變型，分析野生型和突變型CRYAB在晶狀體上皮細胞HLE的亞細胞定位。通過熒光顯微鏡的觀察，發(fā)現(xiàn)野生型CRYAB主要定位于細胞質(zhì)，分布相對均勻；突變型CRYAB定位于細胞質(zhì)和細胞核，推測可能發(fā)生了轉(zhuǎn)位障礙。在核輸出抑制劑LMB作用下，CRYAB核輸出受到抑制，使得蛋白表達后聚