多殺性巴氏桿菌分型分析及其感染雞Il-1β，Il-6轉(zhuǎn)錄變化研究.pdf

1、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida，P.multocida），能夠引起人和動(dòng)物共同感染，引起禽霍亂，豬萎縮性鼻炎、豬肺疫等巴氏桿菌病。巴氏桿菌病在世界各個(gè)地區(qū)均可暴發(fā)，對(duì)家畜家禽及養(yǎng)殖業(yè)有很大的影響。多殺性巴氏桿菌有多種血清型，不同動(dòng)物來(lái)源的多殺性巴氏桿菌分離株的基因組存在差異，不同毒力菌株在基因組上也存在差異。
　　本研究以國(guó)內(nèi)部分地區(qū)36株P(guān).multicida為研究對(duì)象，利用莢膜多重PCR、脂多糖多重

2、PCR方法進(jìn)行分型鑒定，并通過(guò)多位點(diǎn)序列分型方法對(duì)菌株進(jìn)行遺傳演化分析。結(jié)果顯示36株P(guān).multicida包括A，B和D3種莢膜血清型及L1，L2，L3和L64種脂多糖基因型。禽源P.multicida以莢膜A型，脂多糖L1型為主，其中禽源菌株C48-1，Pm72-4，Pm731均為莢膜A型，脂多糖L1型。多位點(diǎn)序列分型技術(shù)將多其分為ST129，ST8，ST58，ST5，ST13，ST50和ST122等7種ST型，禽源P.multic

3、ida主要為ST129型。
　　20只3月齡SPF雞隨機(jī)分為4組，實(shí)驗(yàn)組分別感染莢膜型和脂多糖型相同的禽源多殺性巴氏桿菌菌株C48-1，50 CFU/0.1mL;Pm72-4，2×104 CFU/0.1mL; Pm731，2×109 CFU/0.1 mL各0.1mL，對(duì)照組注射0.1mL PBS。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別在感染后剖殺死亡雞，未死亡的雞在14d時(shí)全部剖殺，迅速取脾臟樣品用于RNA提取。采用SYBR Green染料實(shí)時(shí)熒光定景P

4、CR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組TLR4、MyD88、IL-1β和IL-6基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的變化，通過(guò)基因表達(dá)量變化研究感染多殺性巴氏桿菌后IL-1β和IL-6轉(zhuǎn)錄變化。結(jié)果顯示:感染菌株C48-1后5只雞全部死亡，感染Pm72-4菌株后有2只雞存活，感染Pm731菌株和注射PBS后5只雞全部存活。表明C48-1菌株對(duì)SPF雞有很強(qiáng)的致病性，屬于強(qiáng)毒株;菌株P(guān)m72-4對(duì)SPF雞有致病性，但毒力較弱;菌株P(guān)m731對(duì)SPF雞不致死，屬于弱毒

5、株。熒光定量檢測(cè)TLR4、MyD88、IL-1β和IL-6的表達(dá)量結(jié)果為，與對(duì)照組相比較強(qiáng)毒株C48-1感染后，TLR4、MyD88和IL-6的表達(dá)量均上調(diào)，且差異顯著，而Pm72-4和Pm731感染組與對(duì)照組相比差異不顯著;相對(duì)于對(duì)照組感染C48-1、Pm72-4和Pm731后產(chǎn)生IL-1β的量均上調(diào)，但差異均不顯著。表明感染多殺性巴氏桿菌強(qiáng)毒株C48-1后激活了細(xì)胞因子IL-6，但不能激活I(lǐng)L-1β，感染多殺性巴氏桿菌弱毒株P(guān)m72