CYP3A5對環(huán)孢素代謝影響的體外研究.pdf

1、本課題旨在體外通過CYP3A5基因多態(tài)性對環(huán)孢素處置影響的研究，為基因導向個體化藥物治療在器官移植領域的實施奠定理論基礎。為此我們進行了一系列的研究，首先我們采用PCR-RFLP方法分析CYP3A5*3在中國漢族人群中的分布特征并進行了男女性別間的比較；通過對健康受試者和腎移植患者的環(huán)孢素血藥濃度發(fā)分析，我們認為CYP3A5*3基因多態(tài)性在男、女性別間的分布與健康人群無差別，而CYP3A5*3基因多態(tài)性與環(huán)孢素藥代動力學參數(shù)存在一定的關

2、系；我們還通過對肝微粒體的蛋白質定量分析和體外藥物孵育實驗，明確了CYP3A5*3基因多態(tài)性與藥物代謝酶活性和酶蛋白量的關系；最后我們體外重組了的CYP3A5蛋白酶，建立了高產量快速純化的CYP3A原核瞬時表達系統(tǒng)。研究結果表明：(1)在中國漢族人群中CYP3A5*3突變等位基因發(fā)生頻率約為0.724；結果提示大約54.7％ 的中國漢族人缺乏CYP3A5藥物代謝酶；不同種族間CYP3A5*3突 變等位基因發(fā)生頻率存在差異；CYP3A

3、5*3突變發(fā)生頻率在男性和女性間無明顯差異。(2)對通過測序驗證明確了基因型的肝微粒體進行 Western-blot檢測和藥物體外孵育實驗得出：CYP3A5*3攜帶者的蛋白質表達量要低于CYP3A5*l攜帶者；即使是相同的基因型，男性蛋白質的表達量較女性低；取相同CYP3A5酶量的肝微粒體進行體外孵育實驗，發(fā)現(xiàn)CYP3A5*l樣本對藥物代謝量明顯高于CYP3A5*3樣本。(3)在對27名腎移植患者進行了PCR-RFLP分析，得出CYP