骨靶向抗骨質(zhì)疏松藥物——依替二膦酸鍶的合成及藥效研究.pdf

1、目的： (1)改進(jìn)鍶鹽母體設(shè)計，尋找并合成一種具有毒副作用小、一定的溶解度、能夠有效地改善鍶的生物利用度同時具有骨靶向性抗骨質(zhì)疏松效應(yīng)的化合物。 (2)檢測該化合物體外對成骨樣細(xì)胞株的毒性和對其骨形成生理功能的影響。 (3)進(jìn)一步檢測該化合物對絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松動物模型的治療作用。 方法： (1)改進(jìn)鍶鹽的母體：以依替二膦酸根作為鍶鹽的母體，將鍶與依替二膦酸兩者拼合起來合成新化合依替二膦酸鍶——一種

2、新的鍶鹽。 (2)進(jìn)行體外羥磷灰石吸附實驗，以檢測依替二膦酸鍶的體外骨靶向性。 (3)通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、臺盼藍(lán)排斥實驗和MTT比色，檢測10<'-5>M～10<'-3>M濃度的依替二膦酸二鈉、二氯化鍶和依替二膦酸鍶對ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的毒性。 (4)通過堿性磷酸酶和I型膠原，檢測10<'-5>M～10<'-3>M濃度的依替二膦酸二鈉、二氯化鍶和依替二膦酸鍶對ROS17/2．8成骨樣細(xì)胞成骨活性的影響。

3、 (5)通過對不同時點絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠血清中BGP和TRAP-5b的測定，檢測依替二膦酸二鈉(80mg/Kg．day)、二氯化鍶(60mg/Kg．day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg．day，100mg/Kg．day和150mg/Kg．day)對絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝的影響。 (6)通過對不同時點絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨及第二腰椎BMD的測定，檢測依替二膦酸二鈉(80mg/Kg.day)、二氯化鍶(60mg/k

4、g.day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg.day,100mg/Kg.day和150mg/Kg.day)對絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨和椎骨BMD的影響。 (7)通過對不同時點絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨及第二腰椎生物力學(xué)特性的測定，檢測依替二膦酸二鈉(80mg/Kg.day)、二氯化鍶(60mg/Kg.day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg.day,100mg/Kg.day和150mg/Kg.day)對絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨和椎骨生

5、物力學(xué)性質(zhì)的影響。 (8)通過對不同時點絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨及第一腰椎組織形態(tài)學(xué)的觀察，檢察依替二膦酸二鈉(80mg/Kg.day)、二氯化鍶(60mg/kg.day)和依替二膦酸鍶(50mg/Kg.day,100mg/Kg.day和150mg/Kg.day)對絕經(jīng)期后骨質(zhì)疏松大鼠股骨和椎骨組織形態(tài)學(xué)的影響。 結(jié)論： (1)運用冰乙酸與三氯化磷通過化學(xué)縮合等步驟，可于實驗室得到較高純度的依替膦酸鍶。

6、(2)氯化鍶溶液中的鍶離子對羥基磷灰石無親和性；依替二膦酸根能夠顯著提高鍶原子對羥基磷灰石的親和性。 (3)本實驗發(fā)現(xiàn)新化合物依替二膦酸鍶在10<'-5>～10<'-3>M濃度對ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的無明顯毒性作用。依替二膦酸鍶對ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的生長和增殖的促進(jìn)作用。 (4)二氯化鍶(60mg/Kg．day)和依替二膦酸鍶(100mg/Kg．day)能增強(qiáng)體外培養(yǎng)ROS17/2.8成骨樣細(xì)胞的堿性磷

7、酸酶活性和細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原的表達(dá)。 (5)依替二膦酸鍶對去勢后大鼠成骨細(xì)胞分泌BGP水平無抑制作用。依替二膦酸鍶50 mg/Kg．day、100mg/Kg．day和150mg/Kg．day治療劑量均能有效抑制破骨細(xì)胞分泌TRAP-5b的能力。 (6)50mg/Kg．d、100mg/Kg．d和150mg/Kg．d三種不同劑量的依替二膦酸鍶均能有效地增加去勢大鼠椎體和股骨的BMD，其中以150mg/Kg．d干預(yù)組為明顯。

8、 (7)依替二膦酸鍶(100mg/Kg．day)干預(yù)8周后即可增強(qiáng)股骨的抗彎曲強(qiáng)度。依替二膦酸鍶干預(yù)4周后，可起到防止去勢所致的大鼠腰椎抗壓縮強(qiáng)度迅速下降；依替二磷酸100mg/Kg和150 mg/Kg治療劑量治療12周后，能夠明顯改善大鼠腰椎的抗壓縮力學(xué)強(qiáng)度。 (8)50mg/Kg．day、100mG/Kg．day和150mg/Kg．day依替二膦酸鍶治療，能明顯明顯抑制絕經(jīng)期后大鼠骨吸收活動，減少骨質(zhì)丟失。依替二膦酸鍶治療