殼聚糖-白念菌熱休克蛋白90核酸疫苗納米粒子的制備及其緩釋作用初探.pdf

1、殼聚糖(CS)是多糖中唯一天然堿性陽(yáng)離子多聚糖。近年來(lái)，因其生物可降解性、生物粘附性、良好的生物相容性，以及較低的細(xì)胞毒性而得到廣泛應(yīng)用;殼聚糖在弱酸性溶液中氨基發(fā)生質(zhì)子化，可以與表面帶有負(fù)電荷的核酸通過(guò)靜電作用形成納米級(jí)粒子。提高核酸利用度，保護(hù)核酸不被酶降解等眾多特性，使其作為優(yōu)良的核酸載體受到廣泛關(guān)注。
　　本文使用復(fù)凝法將殼聚糖與白色念珠菌熱休克蛋白90重組質(zhì)粒(DNAch90)形成納米粒子，并對(duì)其在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的緩釋作用進(jìn)

2、行初步探討。
　　1、多種因素對(duì)納米粒子大小及電位產(chǎn)生影響
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明N/P比值、DNAch90濃度、pH值、Na2SO4濃度、水浴溫度與納米粒子粒徑大小呈正相關(guān);N/P比值和DNAch90濃度與納米粒子表面電位呈正相關(guān);pH值、Na2SO4濃度和水浴溫度與顆粒表面電位呈負(fù)相關(guān)。以此優(yōu)化條件制備CS-DNAch90納米粒子。
　　2、初步探究CS-DNAch90納米粒子的理化性質(zhì)和相關(guān)特性
　　測(cè)定納米粒子

3、的形態(tài)、粒徑大小和分布、表面電位。結(jié)果顯示制備的納米粒子大小均一，直徑在166nm左右;分散度良好;表面電位也為正值。
　　測(cè)量納米粒子的包封率和載藥量。結(jié)果顯示其包封率高于90％，載藥量大于30％;考量了CS濃度對(duì)包封率的影響。CS濃度與包封率正相關(guān)。
　　凝膠阻滯分析實(shí)驗(yàn)說(shuō)明粒子表面帶有正電荷，殼聚糖將DNAch90包裹在顆粒中心;酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，CS-DNAch90納米粒抵御DNAch90被酶解。
　　3、

4、CS-DNAch90納米粒子在動(dòng)物體內(nèi)對(duì)核酸疫苗的緩釋作用
　　以CS-DNAch90納米粒子為實(shí)驗(yàn)材料，采用皮下兩點(diǎn)注射的方式免疫ICR小鼠，免疫兩次，間隔時(shí)間為兩周。免疫小鼠抗血清與R-Hsp90蛋白Western Blot結(jié)果表明，CS-DNAch90納米粒子能夠使免疫小鼠產(chǎn)生抗R-Hsp90特異性抗體。ELISA檢測(cè)免疫小鼠抗血清抗R-Hsp90特異性抗體IgG、IgG1及IgG2b含量，CS-DNAch90納米粒子組的抗