抗Ⅰ型超敏反應(yīng)天然藥物體外細(xì)胞篩選模型的建立與應(yīng)用.pdf

1、目的：建立抗Ⅰ型超敏反應(yīng)藥物體外細(xì)胞篩選模型，用于天然藥物Q不同提取物的抗Ⅰ型超敏反應(yīng)作用篩選。針對(duì)篩選出的Q活性提取物，進(jìn)一步探討其對(duì)Th1/Th2平衡的影響。 方法：(1)應(yīng)用MTT法檢測(cè)陽(yáng)性藥色甘酸鈉和天然藥物Q對(duì)RBL-2H3細(xì)胞增殖和原代大鼠肥大細(xì)胞(RPMC)生長(zhǎng)的影響，檢測(cè)地塞米松和Q對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖的影響。(2)應(yīng)用酶學(xué)法檢測(cè)色甘酸鈉和Q對(duì)RBL-2H3細(xì)胞和RPMC脫顆粒釋放β-己糖胺酶的影響。(3)應(yīng)用ELI

2、SA法檢測(cè)Q3、Q4對(duì)致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-4和IFN-γ的影響。 結(jié)果：(1)MTT法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，陽(yáng)性藥色甘酸鈉和Q在給藥濃度范圍為1～100μg/mL時(shí)，分別對(duì)RBL-2H3細(xì)胞增殖和原代大鼠肥大細(xì)胞(RPMC)生長(zhǎng)有抑制作用，其抑制率均小于50％，初步確定此濃度范圍可用于肥大細(xì)胞酶學(xué)實(shí)驗(yàn)。小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，陽(yáng)性藥地塞米松和Q3、Q4在濃度范圍為1～100μg/mL時(shí)對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制率均小于50％，此藥物

3、濃度范圍可用于ELISA實(shí)驗(yàn)。(2)兩個(gè)細(xì)胞模型(RBL-2H3細(xì)胞和RPMC脫顆粒反應(yīng)模型)基本建立，陽(yáng)性藥色甘酸鈉可抑制RBL-2H3細(xì)胞和RPMC脫顆粒釋放β-己糖胺酶(與模型組比較，P＜0.01)。(3)應(yīng)用RBL-2H3細(xì)胞和RPMC脫顆粒反應(yīng)模型篩選天然藥物提取物Q1～Q4，得到可能具有抑制肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)活性的提取物Q3、Q4。(4)ELISA實(shí)驗(yàn)中，Q3、Q4均可同時(shí)下調(diào)小鼠淋巴細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ水平(與模型

4、組比較，P＜0.01)，可能參與Thl/Th2平衡的調(diào)節(jié)。 結(jié)論：本課題實(shí)驗(yàn)探討了不同來源肥大細(xì)胞(RBL-2H3細(xì)胞和RPMC)脫顆粒反應(yīng)在抗I型過敏反應(yīng)藥物篩選方面的相似性，初步建立了兩個(gè)抗Ⅰ型超敏反應(yīng)藥物體外細(xì)胞篩選模型，同時(shí)應(yīng)用這些模型篩選天然藥物Q的不同提取物Q1～Q4。Q3和Q4抑制RBL-2H3細(xì)胞和RPMC脫顆粒釋放β-己糖胺酶，可能為Q植物抗Ⅰ型超敏反應(yīng)活性部位。Q3和Q4抑制致敏小鼠分泌IL-4和IFN-γ，