TACI-Fc和BCMA-Fc融合蛋白的表達(dá)、純化以及生物功能鑒定.pdf

1、B淋巴細(xì)胞刺激因子（Blymphocytestimulator，BLyS），又稱腫瘤壞死因子家族的B細(xì)胞活化分子（Bcell-activatingfactorbelongedtoTNFfamily，BAFF）是一種重要的腫瘤壞死因子超家族成員。穿膜蛋白活化物（transmembraneactivatorandCAMLinteractor，TACI）和B細(xì)胞成熟抗原（Bcellmaturationantigen，BCMA）與BAFF-R（

2、BAFFReceptor）一起成為BLyS的三個(gè)受體。本文中我們進(jìn)行了人TACI全長及胞外區(qū)基因的釣取，與人IgG1的Fc段的連接，構(gòu)建其原核表達(dá)載體。并進(jìn)行了TACI-Fc和BCMA-Fc重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、純化及生物學(xué)活性的鑒定。旨在為進(jìn)一步研究BLyS與其受體的相互作用模式和開發(fā)用于治療自身免疫疾病的BLyS拮抗劑奠定基礎(chǔ)。該項(xiàng)研究取得的主要結(jié)果如下： （1）經(jīng)RT-PCR法成功克隆了編碼人TACI的全長基因，大小約為90

3、0bp，測序結(jié)果與GenBank結(jié)果一致。 （2）擴(kuò)增的TACI胞外區(qū)與人IgG1的Fc段基因連接后插入原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a，成功地構(gòu)建了重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a-TACI-Fc。 （3）上述質(zhì)粒和實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建好的pET28a-BCMA-Fc重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3），經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，并優(yōu)化誘導(dǎo)條件，獲得了較高水平的表達(dá)。SDS-PAGE分析可見，分別在大約40kDa和35kDa處有目的條帶。West