重組促卵泡素-Fc融合蛋白的安全性評價.pdf

1、促卵泡素(Follicular Stimulating Hormone，F(xiàn)SH)是一種由動物腦垂體合成并分泌的激素，屬于糖基化蛋白質(zhì)激素，對機體的發(fā)育、生長、性成熟和繁殖等一系列生理活動都具有重要的調(diào)節(jié)作用，因此促卵泡素不論是在畜牧生產(chǎn)還是在人類不育癥的治療上均有重要應(yīng)用價值。在實際生產(chǎn)和應(yīng)用中，重組促卵泡素具有更高的活性，更穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)和更低的價格。為客觀評價重組促卵泡素-Fc融合蛋白的毒性，本研究對重組促卵泡素-Fc融合蛋白分別進行了

2、急性毒性試驗、重復(fù)染毒試驗和致突變試驗，為隨后進行的臨床應(yīng)用研究提供科學(xué)依據(jù)。
　　1.急性毒性試驗
　　20只清潔級ICR小鼠，雌雄各半，采用最大給藥量法，肌內(nèi)注射染毒。結(jié)果表明，廣州威生醫(yī)藥科技有限公司研制的重組促卵泡素-Fc融合蛋白肌注LD50大于2g/kg b.w.。根據(jù)WTO有關(guān)化學(xué)物急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)進行評價，重組促卵泡素-Fc融合蛋白屬實際無毒。
　　2.重復(fù)染毒試驗
　　80只Wister大鼠，隨機

3、分成高、中、低劑量組和對照組，每組20只，雌雄各半，受試物重組促卵泡素-Fc融合蛋白設(shè)1000U/kg b.w./d、500U/kg b.w./d和50U/kg b.w./d三個劑量組;另設(shè)一生理鹽水對照組。在大鼠后肢大腿外側(cè)肌肉內(nèi)注入藥液，每天一次，連續(xù)給藥14d。在最后一次染毒結(jié)束后24h內(nèi)采集所有存活大鼠血樣測定血常規(guī)、血清生化指標(biāo)，并進行病理解剖及病理組織學(xué)檢查。結(jié)果表明，試驗組各項指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，與對照組無顯著差異。在試驗

4、條件下，重組促卵泡素-Fc融合蛋白連續(xù)14d重復(fù)肌內(nèi)注射不會對實驗動物大鼠產(chǎn)生明顯毒性副作用。
　　3.致突變試驗
　　3.1精子畸形試驗
　　60只清潔級ICR小鼠隨機分為五組，每組12只。重組促卵泡素-Fc融合蛋白給藥劑量分別設(shè)為375 U/kg b.w.、187.5 U/kg b.w.、93.75 U/kg b.w.，另分別設(shè)環(huán)磷酰胺陽性對照組和無菌水陰性對照組。按常規(guī)方法進行小鼠精子畸形試驗，腹腔注射給予，連續(xù)

5、5天，從首次給予受試物計第35d頸椎脫臼處死動物，取雙側(cè)附睪制片，每只動物計數(shù)1000個精子中的畸形數(shù)，計算畸形率。試驗結(jié)果顯示，重組促卵泡素-Fc融合蛋白對小鼠精子無影響，表明重組促卵泡素-Fc融合蛋白對生殖細(xì)胞無遺傳毒性。
　　3.2微核試驗
　　選用50只清潔級ICR小鼠隨機分為五組。每組10只。重組促卵泡素-Fc融合蛋白給藥劑量分別設(shè)為375 U/kg b.w.、187.5 U/kg b.w.、93.75 U/kg

6、b.w.，另分別設(shè)環(huán)磷酰胺陽性對照組和無菌水陰性對照組。于第二次給藥后6h取材、制片，計算微核率。試驗結(jié)果顯示，重組促卵泡素-Fc融合蛋白對小鼠骨髓細(xì)胞的微核率無影響。
　　3.3 Ames試驗
　　通過對重組促卵泡素-Fc融合蛋白進行SD小鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗，評價該藥的潛在致突變性。用重組促卵泡素-Fc融合蛋白制備混懸液進行試驗，采用平板摻入法，計數(shù)TA97、TA98、TA100和TA102標(biāo)準(zhǔn)測試菌株在4個不同濃