原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)生殖細胞腫瘤細胞起源、c-kit基因突變和染色體i（12p）異常研究.pdf

1、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)生殖細胞腫瘤(Centralnervoussystemgermcelltumors，CNSGCTs)是一組較為罕見的原發(fā)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的生殖細胞腫瘤。主要發(fā)生于兒童和青少年，其組織形態(tài)學和生物學行為與起源于性腺和其他性腺外的GCTs相似。CNSGCTs主要發(fā)生于身體中線部位，如丘腦、鞍區(qū)、第三腦室、基底節(jié)等部位。臨床癥狀與腫瘤發(fā)生部位密切相關(guān)。CNSGCTs組織學WHO分為生殖細胞瘤、畸胎瘤、卵黃囊瘤、胚胎性癌、絨毛

2、膜癌以及混合性腫瘤(Mixedgermcelltumors，MGCTs)。 與性腺GCTs相比，CNSGCTs臨床病理存在異質(zhì)性，特征獨特，診斷和治療有一定困難。本研究通過文獻復習，發(fā)現(xiàn)其在中國大陸呈較高發(fā)病率，且有升高趨勢。目前國內(nèi)關(guān)于CNSGCTs的研究多集中于個案報道和臨床分析，研究的病例數(shù)較少，罕見全面的臨床、病理及免疫組織化學特征的研究，對CNSGCTs分子遺傳學方面的研究在國內(nèi)尚未見報道。 本研究：①了解CN

3、SGCTs的臨床病理和免疫組化特征，探討CNSGCTs的細胞起源；②檢測CNSGCTsc-kit基因突變情況。③應用FISH技術(shù)檢測CNSGCTs12號染色異常，選擇位于12p上的可能候選抑癌基因p27kipl進行研究。 第一部分：收集23例原發(fā)性CNSGCTs患者的臨床資料，應用HE染色、免疫組織化學技術(shù)對CNSGCTs的臨床病理和免疫組織化學特征(腫瘤組織PLAP、OCT3/4和c-kit蛋白表達)進行分析。本組23例患者分

4、別占同期CNS腫瘤和性腺外惡性GCTs的8.7％和37.6％，主要發(fā)生于兒童和青少年，平均年齡16.9歲(7～36歲)，73.9％的患者年齡小于20歲，52.2％的患者年齡在11～20歲間。CNSGCTs好發(fā)于男性，男：女之比為3.6:1?；颊咝g(shù)前病程5天～5年，平均10.4月。主要發(fā)生于松果體，鞍區(qū)、第三腦室、下丘腦等身體中線部位，脊髓和基底節(jié)相對少見。臨床癥狀與發(fā)病部位密切相關(guān)，常見有頭痛、惡心、嘔吐、多飲、多尿、復視、斜視、視力下

5、降、四肢感覺異常、麻痹、行走不穩(wěn)等，呈非特異性CNS占位性病變的表現(xiàn)，但CNSGCTs臨床癥狀也有其異質(zhì)性，23例中青春期前患者外生殖器成人型伴有性早熟4例，性欲減退、毛發(fā)脫落1例，生長發(fā)育遲緩、Cushing面容1例，閉經(jīng)1例。腫瘤大小1.5×1×1cm至6×5.5×4cm不等。組織學上生殖細胞瘤占73.9％，21.7％為畸胎瘤(teratoma,T)(17.4％為成熟性畸胎瘤(MT)，4.3％為未成熟性畸胎瘤(IT))，4.3％為M

6、GCTs。隨訪患者中除MT外，均行放療，隨訪成功16例患者中僅1例于術(shù)后2周死亡，其余患者腫瘤未見復發(fā)和轉(zhuǎn)移。 23例患者中17例生殖細胞瘤和1例MGCT中生殖細胞瘤成分均不同程度地表達原始生殖細胞(PGCs)特異性標記OCT3/4，c-kit和PLAP(生殖細胞瘤中的表達分別為100％，100％和76.5％)。1例MGCT中卵黃囊瘤成分c-kit+/PLAP-/OCT3/4-，胚胎性癌成分c-kit-/PLAP+/OCT3/4

7、+。5例畸胎瘤(MT和IT)OCT3/4，c-kit和PLAP均不表達。23例腫瘤均發(fā)生于身體中線部位，與胚胎發(fā)育過程中PGCs游走路線一致。組織形態(tài)學類似性腺及性腺外其它部位的GCTs。以上幾點均支持CNSGCTs起源于胚胎發(fā)育過程中游走錯誤的原始生殖細胞理論。 與性腺和其它性腺外GCTs相比，CNSGCTs因發(fā)病部位特殊，臨床病理特征較獨特，有時手術(shù)難度大，送檢組織非常小，病理診斷困難。OCT3/4，c-kit和PLAP在生

8、殖細胞瘤中的廣泛表達將為CNSGCTs的診斷和鑒別診斷提供極大幫助。 第二部分：采用PCR擴增，直接測序的方法對18例原發(fā)性CNSGCTs中c-kit基因第9，11，13，17號外顯子突變情況進行檢測。23例CNSGCTs中2例生殖細胞瘤因組織太小DNA抽提失敗，3例(2例畸胎瘤和1例生殖細胞瘤)雖然擴增出目標基因片段，但未達到測序濃度要求。18例中1例生殖細胞瘤發(fā)生了c-kit基因突變，突變率為5.6％(1/18)，發(fā)生于11

9、號外顯子，突變類型為框內(nèi)缺失，位于11號外顯子近膜區(qū)的5’端第557、558密碼子處，為氨基酸WK(Trp-Lys)缺失，屬功能性突變。未發(fā)現(xiàn)有9號、13號、17號外顯子的突變。本組c-kit基因突變發(fā)生率與文獻報道性腺GCTs有相似之處(發(fā)生率為5～30％，主要表現(xiàn)為17和11號外顯子突變)。c-kit基因突變改變了蛋白構(gòu)象，導致KIT持續(xù)性非配體依賴的磷酸化，對細胞形成持續(xù)的增殖信號，導致細胞增生。c-kit基因突變可能在CNSGC

10、Ts發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用，同時c-kit基因突變的存在和c-kit蛋白的強表達為酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼治療CNSGCTs提供了理論依據(jù)。 第三部分：采用12號染色體計數(shù)探針(CEP12，著絲粒，橘黃色)和12號染色體端粒探針(TelVysion12p，端粒，綠色)雙色FISH技術(shù)檢測23例CNSGCTs(福爾馬林固定，石蠟包埋組織切片)是否存在12號染色體異常，尤其是i(12p)的改變，為12p上候選基因的研究提供理論依據(jù)

11、。研究12號染色體異常的發(fā)生率和異常類型，以及CNSGCTs12號染色體異常與患者性別、年齡、腫瘤大小及Ki-67LI有無相關(guān)性。選擇12p上可能的候選抑癌基因p27kipl進行研究，探討其在CNSGCTs中表達情況以及與12p異常和Ki-67LI的關(guān)系，為判斷預后提供可能的理論依據(jù)。 23例CNSGCTs11例出現(xiàn)12p異常(47.8％)，其中9例(39.1％)為i(12p)異常，4例為12p(17.4％)擴增，既有i(12p

12、)異常又有12p擴增2例(8.7％)。1例MGCT患者在生殖細胞瘤和卵黃囊瘤成分中均檢測到i(12p)異常，胚胎性癌成分未檢測到12p異常。4例成熟性畸胎瘤、1例未成熟性畸胎瘤和6例生殖細胞瘤均未檢測到12p的異常。在不同的組織學類型中i(12p)和12p擴增發(fā)生率不同，17例生殖細胞瘤中i(12p)異常和12p擴增的發(fā)生率分別為47.1％和23.5％。5例畸胎瘤(4例MT，1例IT)中i(12p)異常和12p擴增的發(fā)生率均為0。12號

13、染色體異常與患者性別、年齡、腫瘤大小及Ki-67LI無顯著相關(guān)性。 23例CNSGCTs，p27kipl強表達4例(17.4％)，均為畸胎瘤(3例MT，1例IT)。弱表達6例(26.1％)(1例MT，5例生殖細胞瘤)，表達缺失13例(56.5％)(12例生殖細胞瘤和1例MGCT)，MGCT中生殖細胞瘤、卵黃囊瘤和胚胎性癌各成分p27kipl表達均缺失。p27kipl表達與12p擴增無相關(guān)性。p27kipl表達與：Ki-67LI呈