先天性肺囊性腺瘤樣畸形中TTF-1、SP-B、hMSH-2及TGF-β1的表達研究.pdf

1、背景與目的：先天性肺囊性腺瘤樣畸形(CCAM)是肺的先天性錯構(gòu)瘤性病變，占先天性肺部病變25％。常累及一個或部分肺葉，也有多個肺葉被累及的報道。此病變男性稍多于女性，無種族差異。大部分病人一出生就會發(fā)病，但也可見較大兒童及成人發(fā)病。早在1949年我國病理學(xué)家秦光煜和唐敏一提出先天性肺腺瘤樣畸形一病，他們報道1例并回顧了10例，表現(xiàn)為遠(yuǎn)端支氣管的腺瘤樣及腺管樣增生，主要發(fā)生在死產(chǎn)或有肺水腫的早產(chǎn)新生兒，患兒常伴有明顯肺發(fā)育障礙和肺功能低下

2、。目前國際國內(nèi)對于其臨床和影象診斷報道的比較多，而對于其發(fā)病機制的研究鮮少看到報道。因此，探索CCAM的形成原因，明確CCAM發(fā)生、發(fā)展的分子生物學(xué)機制，為進一步的預(yù)防和治療提供依據(jù)非常重要。 甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(TTF-1)是在甲狀腺和肺上皮細(xì)胞內(nèi)表達的一種轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞中具有DNA結(jié)合和轉(zhuǎn)錄活化功能，在肺的細(xì)胞分化和組織發(fā)生過程中起到重要作用，參與肺的形態(tài)發(fā)生和肺表面活性物質(zhì)的形成。表面活性蛋白B(SP-B)由肺泡Ⅱ型上皮

3、細(xì)胞和支氣管Clara細(xì)胞分泌，主要生理作用是減少肺表面張力，促進磷脂在氣液界面的吸附和擴張。SP-B蛋白合成與代謝的異常與許多疾病發(fā)生有關(guān)，如肺透明膜病、肺部炎癥和哮喘等。錯配修復(fù)基因2(hMSH-2)足目前發(fā)現(xiàn)人類9種錯配修復(fù)基因之一，其主要作用為：DNA復(fù)制后堿基錯配的修復(fù)、維持基因組的完整性和穩(wěn)定性、避免遺傳物質(zhì)產(chǎn)生突變、保證DNA復(fù)制的高度保真性，其突變可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是轉(zhuǎn)化生長因子家族中的

4、一個亞型，在正常妊娠胎盤、子宮蛻膜及胎兒中均有表達，參與妊娠過程中多種生物學(xué)功能的調(diào)節(jié)。在胚胎發(fā)生、器官發(fā)育、組織修復(fù)以及機體免疫等過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，與許多疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Morotti等報道了TTF-1在CCAM中的表達，而SP-B、hMSH-2、和TGF-β1在CCAM中的研究，目前國內(nèi)外相關(guān)報道較少。本文研究TTF-1、SP-B、hMSH-2、和TGF-β1在CCAM中的表達，探討其在CCAM病理分型及發(fā)病機制中

5、的意義。 材料與方法：選擇我院及省兒童醫(yī)院2000年1月～2006年12月、年齡≤15歲的少年兒童的先天性肺囊性腺瘤樣畸形手術(shù)存檔蠟塊標(biāo)本52例為病例組，其中CCAMⅠ型28例、CCAMⅡ型13例、CCAMⅢ型11例。同時以不同時期人胚胎肺組織15例(假腺期5例、小管期5例、原始肺泡期5例)和正常兒童肺組織9例作為對照組。所有標(biāo)本經(jīng)HE方法染色診斷并分組。對同一批蠟塊采取連續(xù)切片，用免疫組織化學(xué)方法(EliVision法)檢測T

6、TF-1、SP-B、hMSH-2及TGF-β1蛋白的表達，用原位雜交方法檢測TGF-BlmRNA的表達。 結(jié)果： 1.FTF-1在正常胚胎肺組織、兒童肺組織及CCAM中的表達TTF-1主要表達于支氣管非纖毛上皮細(xì)胞及肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。早在胚胎發(fā)育的12周即見其表達，不同時期胚胎肺及正常兒童肺組織TTF-1蛋白的表達量有明顯差異(P＜0.05)，且隨著肺組織的發(fā)育TTF-1的表達逐漸減少；但原始肺泡期與正常肺組織

7、相比，差異無顯著性(P＞0.05)。 在病例組中，CCAMⅠ型的囊腔壁很少見到TTF-1的表達，偶爾在上皮下的基底細(xì)胞可見較弱表達；TTF-1在CCAMⅡ型囊壁上皮的表達率達40％；而CCAMⅢ型中，TTF-1在囊壁的表達率為80％左右。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果表明，TTF-1在CCAMⅠ、Ⅱ、Ⅲ型中表達有明顯差異(P＜0.01)。 2.SP-B在正常胚胎肺組織、兒章肺組織及CCAM中的表達SP-B主要表達于支氣管非纖毛上皮細(xì)胞及

8、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)。在胚胎發(fā)育的16周可見其表達，不同時期胚胎肺及正常兒章肺組織SP-B蛋白的表達量有明顯差異(P＜0.05)，且隨著肺組織的發(fā)育其表達逐漸增多；但原始肺泡期與正常肺組織相比，差異無顯著性(P＞0.05)。在病例組中，CCAMⅠ型僅見散在的較弱表達，而在CCAMⅡ型中陽性率為40％左右，在CCAMⅢ型中囊壁上皮細(xì)胞的陽性率近80％。 用Spearman秩相關(guān)分析，SP-B與TTF-1在胚胎肺中的表達呈負(fù)相

9、關(guān)(P＜0.01)；在正常兒章肺組織與CCAM中兩者的表達較一致。 3.hMSH-2在正常胚胎肺組織、兒童肺組織及CCAM中的表達hMSH-2主要表達于肺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，間質(zhì)纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞也可見表達。病例組CCAMⅠ、Ⅱ、Ⅲ型的hMSH-2蛋白表達量均低于正常胚胎肺及兒童肺組織，差異有顯著性(P＜0.05)；不同時期胚胎肺及正常兒章肺組織hMSH-2蛋白的表達量無明顯差異(P＞0.05)；CCAMⅠ型與CCAMⅡ型比

10、較，差異無顯著性(P＞0.05)；CCAMⅠ型與CCAMⅢ型比較，CCAMⅡ型與CCAMⅢ型比較，差異均有顯著性(P＜0.05)。 4.FGF-β1在正常胚胎肺組織、兒童肺組織及CCAM中的表達TGF-β1蛋白主要表達在上皮和間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞漿中，且不同時期胚胎肺的表達無明顯差異(P＞0.05)。正常肺組織與不同時期胚胎肺組織的表達無明顯差異(P＞0.05)；與正常胚胎肺及兒童肺組織相比，TGF-β1在CCAM中的表達明顯增強，差

11、異具顯著性(P＜0.05)；CCAMⅠ、Ⅱ、Ⅲ之間兩兩比較，統(tǒng)計學(xué)分析無顯著性差異(P＞0.05)。 TGF-β1mRNA主要表達于支氣管周圍平滑肌、囊壁平滑肌及血管平滑肌中，上皮細(xì)胞未見表達。不同時期胚胎肺及正常肺組織TGF-β1mRNA表達無明顯差異(P＞0.05)；病例組與對照組相比差異有顯著性(P＜0.05)；CCAMⅠ、Ⅱ、Ⅲ型之間兩兩比較，統(tǒng)計學(xué)分析無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.在胚胎肺

12、發(fā)育過程中可見TTF-1和SP-B的表達，說明這兩種蛋白都參與了胚胎肺組織的生長發(fā)育；同時，由于SP-B的表達隨TTF-1的減少而逐漸增多，說明TTF-1在促進中晚期胚胎肺發(fā)育表面活性物質(zhì)SP-B的形成中有一定的作用。 2.TTF-1、SP-B在CCAM不同亞型中的表達不同，因此可以作為CCAM病理分型的客觀指標(biāo)用于臨床診斷。 3.hMSH-2蛋白在正常胚胎肺及兒童肺組織中表達較多，而在CCAM中的表達明顯減少，說明CC