先天性肺囊性腺瘤樣畸形中Ki-67、Bcl-2、Bax、GDNF及EGFR的表達研究.pdf

1、目的： 研究Ki-67、Bcl-2、Bax、GDNF、EGFR在胎肺和CCAM中的表達，探討其在胎肺發(fā)育中的作用和CCAM病理分型及發(fā)病機制中的意義。 材料與方法： 選擇我院及浙江省兒童醫(yī)院2000年1月～2008年12月、年齡≤15歲的CCAM患者手術(shù)存檔蠟塊標本58例為病例組，其中CCAMⅠ型35例、CCAMⅡ型15例、CCAMⅢ型8例。不同時期人胚胎正常肺組織15例(假腺期5例、小管期5例、原始肺泡期5例)

2、；同時以兒童正常肺組織10例作為對照組1(CG1)和囊腫周圍相對正常肺組織10例作為對照組2(CG2)。所有標本經(jīng)HE染色診斷并分組。對同一批蠟塊采取連續(xù)切片，用免疫組織化學(xué)EliVision法檢測Ki-67、Bcl-2、Bax、GDNF、EGFR蛋白的表達，用原位雜交方法檢測GDNFmRNA的表達，從甲醛固定石蠟包埋組織中提取GDNF DNA經(jīng)PCR擴增后進行基因測序。 結(jié)果： 1.Ki-67在胎肺及CCAM中的表達

3、 Ki-67蛋白的陽性表達位于細胞核內(nèi)，胎肺不同時期表達部位和表達量不同，假腺期和小管期Ki-67的表達逐漸增多，到了原始肺泡期以后逐漸減弱。在CG1中僅見微弱表達，低于胎肺(P<0.01)。 CCAM各亞型之間比較，CCAMⅠ型明顯較CCAMⅡ型和CCAMⅢ型高(P<0.01)；CCAMⅡ型和CCAMⅢ型比較沒有明顯差別(P>0.1)。CCAM中，Ki-67表達陽性率較CG1和CG2明顯升高(P<0.01)。

4、 2.Bcl-2和Bax在胎肺及CCAM中的表達 Bcl-2和Bax蛋白主要定位于胞漿。胎肺不同時期表達部位和表達量不同，假腺期和小管期表達逐漸增強，原始肺泡期以后表達逐漸減弱。胎肺中Bcl-2在假腺期上皮細胞和三個時期的間質(zhì)細胞的表達均低于CG1(P<0.05)。Bax在假腺期主要表達于間質(zhì)細胞，到了小管期轉(zhuǎn)移至支氣管上皮細胞中。 CCAM中，CCAMⅠ型較CCAMⅡ型、Ⅲ型高(P<0.01)；CCAMⅡ型和Ⅲ型比

5、較沒有明顯差別(P>0.1)。CCAM各亞型均低于CG1，且均具有顯著性差異(P<0.05)。 3.Bax/Bcl-2在胎肺及CCAM中的比較 胎肺各期之間比較，Bax/Bcl-2的比值在假腺期和小管期隨著妊娠周數(shù)的增加逐漸升高，到原始肺泡期以后逐漸降低。上皮細胞中，小管期高于假腺期和CG1(P<0.05)。間質(zhì)細胞中，胎肺假腺期和小管期均顯著高于CG1(P<0.01)。 CCAM中，各亞型均高于CG1和CG2

6、(P<0.01)。用直線相關(guān)分析Bax/Bcl-2的比值與Ki-67蛋白在CCAM中的關(guān)系，R=-0.593， P<0.01，二者呈顯著負相關(guān)。 4.GDNF蛋白和GDNFmRNA在胎肺及CCAM中的表達 GDNF蛋白和GDNFmRNA的陽性表達位于胞漿，胎肺中的表達均高于CG1，但僅小管期有顯著性差別(P<0.05)；胎肺各個時期比較表達均不同，在假腺期和小管期表達逐漸增強，到原始肺泡期后逐漸減弱。在CG1中GDNF

7、的表達極其微弱。 CCAM中，GDNF蛋白和GDNFmRNA在囊壁的陽性定位主要表達于胞漿，部分為核漿型。CCAM不同組織亞型表達強度均不同，CCAMⅠ型強于CCAMⅡ和Ⅲ型(P<0.01)，CCAMⅡ型強于CCAMⅢ型(P<0.01) CCAM高于CG1和CG2(P<0.01)。在CCAMⅢ型以及CG1和CG2中，GDNFmRNA僅表達于囊壁平滑肌及血管平滑肌中，上皮中未見有表達。CCAM中，未發(fā)現(xiàn)有GDNF基因表達的異常。

8、 用直線相關(guān)分析GDNF蛋白與Ki-67蛋白及GDNF蛋白與Bcl-2蛋白在CCAM中表達的關(guān)系，分別R=0.559， P<0.01； R=0.699，P<0.01，均呈顯著正相關(guān)。 5.EGFR蛋白在胎肺及CCAM中的表達 EGFR蛋白主要定位于細胞漿內(nèi)。胎肺小管期和原始肺泡期均高于CG1(P<0.05)；胎肺各個時期相互比較，在假腺期和小管期隨著妊娠周數(shù)的增加逐漸升高，到原始肺泡期以后逐漸降低，不同時期表達

9、部位也有所不同。 CCAM中，EGFR的表達明顯高于CG1和CG2(P<0.01)。CCAM各亞型比較，CCAMⅠ型明顯強于CCAMⅡ型和Ⅲ型(P<0.01)。用直線相關(guān)分析EGFR蛋白與Ki-67蛋白以及EGFR蛋白與GDNF蛋白在CCAM中的表達的關(guān)系，分別R=0.908， P<0.01；R=0.904， P<0.01，二者均呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論： 1.細胞增殖和凋亡這兩個截然相反的行為，在胎肺發(fā)育過程中同

10、時存在，并且保持著平衡，使胎肺在特定的時空得以正常發(fā)育。 2.GDNF和EGFR這兩種蛋白都參與了胎肺組織的生長發(fā)育，且在不同時期發(fā)揮不同的作用。 3.CCAM是細胞增殖和凋亡失調(diào)的結(jié)果，其形成和GDNF基因表達異常可能無關(guān)。 4.GDNF和EGFR可以作為診斷CCAM的一個依據(jù)和CCAM分型的一個參考指標。 5.CCAM是一種類腫瘤疾病，CCAMⅠ型可能具有惡性轉(zhuǎn)化的傾向。 6.GDNF和EGF