MiR-221-222抑制自噬參與多發(fā)性骨髓瘤糖皮質激素耐藥.pdf

1、目的：研究miR-221/222是否通過調節(jié)自噬相關基因ATG4A的表達抑制自噬，從而介導MM細胞的糖皮質激素耐藥。
　　方法：采用Real time RT-PCR方法對臨床MM病人以及正常人骨髓CD138+細胞以及多個骨髓瘤細胞系miR-221/222的表達量進行檢測；采用Real time RT-PCR、Western-blotting分別檢測在骨髓瘤細胞系中ATG4A在mRNA與蛋白的表達水平；使用瞬時轉染方法將miR-22

2、1/222mimics轉染骨髓瘤細胞系MM.1S建立miR-221/222過表達體系后，通過Western-blotting、Real time RT-PCR檢測過表達細胞ATG4A的表達水平；采用電鏡檢測自噬泡、Western-blotting檢測P62蛋白、LC3B-I、LC3B-II蛋白檢測地塞米松作用下，轉染miR-221mimics前后骨髓瘤細胞自噬水平的的變化；采用CCK-8檢測骨髓瘤細胞在加入自噬抑制劑前后地塞米松對細胞死

3、亡的影響，以及過表達miR-221/222和抑制miR-221/222后地塞米松對細胞死亡的影響。
　　結果：在臨床MM病人以及正常人骨髓細胞CD138+細胞中，MM病人的miR-221表達低于正常對照，miR-222表達高于正常對照；在骨髓瘤細胞系中miR-221/222表達量與ATG4A mRNA的表達呈負相關；在MM細胞中，miR-221/222可在mRNA及蛋白水平抑制ATG4A的表達；miR-221/222在MM.1S細

4、胞的基礎表達低于MM.1R細胞的表達，且地塞米松可使地塞米松敏感的MM.1S細胞的miR-221/222顯著減低而耐藥的MM.1R細胞系卻少量減低；過表達miR-221/222可抑制激素敏感的細胞發(fā)生死亡，而抑制miR-221/222表達可促進激素耐藥的細胞發(fā)生死亡；地塞米松可引起MM細胞發(fā)生自噬、且激素敏感細胞系發(fā)生自噬的水平明顯高于激素耐藥的細胞系。抑制自噬可以減少地塞米松誘導的細胞死亡，而miR-221/222可抑制自噬的發(fā)生。<