HIF-1α對缺氧微環(huán)境下垂體腺瘤侵襲機(jī)制調(diào)控的研究.pdf

1、目的:檢測缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)在垂體腺瘤中的表達(dá)及其和腫瘤侵襲性的關(guān)系。通過慢病毒載體RNAi調(diào)控HIF-1α的表達(dá),觀察缺氧微環(huán)境對原代培養(yǎng)的垂體腺瘤細(xì)胞(PACs)侵襲性生物學(xué)行為的影響。
　　材料和方法:免疫組化檢測HIF-1α、MMP-9、VEGF在垂體腺瘤組織中的表達(dá),同時以RT-PCR檢測HIF-1α、MMP-9、VEGF的mRNA水平,分析上述指標(biāo)和腫瘤侵襲性的關(guān)系。原代培養(yǎng)、純化PACs,觀察其體外生長、遷

2、移表現(xiàn),流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,免疫熒光檢測其激素受體表達(dá)。設(shè)計(jì)HIF-1αShRNA序列,構(gòu)建pRNAT-U6.2慢病毒載體,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PACs,RT-PCR、Western-blot檢測干擾效率。建立PACs缺氧模型和體外侵襲模型(Boyden小室),檢測HIF-1α表達(dá)變化,并通過RNAi調(diào)節(jié)HIF-1α表達(dá)水平,觀察PACs侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:HIF-1α蛋白的陽性染色主要分布在PACs胞漿和周圍的部分血管內(nèi)皮細(xì)胞中

3、,HIF-1α蛋白和mRNA水平和腫瘤侵襲性密切相關(guān),和VEGF、MMP-9無明顯相關(guān)性。培養(yǎng)獲得高純度的PACs,侵襲性垂體腺瘤來源的PACs具有較強(qiáng)的增殖、遷移、侵襲能力。在缺氧條件下培養(yǎng)24h以內(nèi)的PACs的HIF-1α表達(dá)明顯上調(diào)。獲得高滴度(5～*105TU/well)的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染PACs后通過Western-blot顯示HIF-1α在mRNA和蛋白水平都得到明顯抑制。體外侵襲實(shí)驗(yàn)顯示受RNAi干擾后的PACs侵襲能力下