HIF-1α對DDAH1的調節(jié)及機制研究.pdf

1、研究目的：觀察DDAH1在CoCl2干預下的表達變化，以及HIF-1α在DDAH1基因調控的作用機制。
　　 方法與結果：選取200g 左右雄性wistar 大鼠若干，隨機分為2組分別為：CoCl2組大鼠腹腔注射CoCl2（30mg/kg）（n=8），NaCl組大鼠腹腔注射生理鹽水（n=8）。我們發(fā)現CoCl2模擬缺氧刺激可以增加DDAH1蛋白的表達。細胞實驗中我們發(fā)現用CoCl2 干預的HUVEC、293T和HepG2中DDA

2、H1的表達與HIF-1α有伴隨效應。接下來的實驗中我們利用HIF-1αSiRNA沉默HIF-1α蛋白的表達，實驗的結果表明HIF-1α能夠調節(jié)DDAH1的表達。對DDAH1啟動子區(qū)的基因序列進行分析，我們發(fā)現有兩個HRE 元件，因此我們構建了DDAH1的啟動子區(qū)不同片段長度的熒光報告基因的質粒，然后瞬時轉染到HepG2和HEK293T中，CoCl2 （200μM）干預8小時后我們檢測熒光素酶活性，結果表明在DDAH1 啟動子-370～-

3、387 有可能是HIF-1α調控DDAH1啟動子的活性區(qū)域。接著將上述質粒的HRE 元件突變，即DDAH1啟動子片段特定位點突變，轉染到細胞，我們發(fā)現在誘導HIF-1α高表達的情況下熒光素酶活性不增加。同時，Ch IP 實驗結果顯示，HIF-1α能夠特異性的結合到DDAH1的啟動子區(qū)。
　　 結論：我們證明DDAH1是缺氧誘導基因，其轉錄是通過HIF-1α結合到大鼠DDAH1啟動子的-370～-387的HRE元件來調控DDAH1