HIF-1α調(diào)節(jié)神經(jīng)母細(xì)胞瘤生物學(xué)特征的機(jī)制研究.pdf

1、目的：神經(jīng)母細(xì)胞瘤（neuroblastoma,NB）是最常見的兒童惡性實(shí)體腫瘤之一，其總體治療效果不佳。當(dāng)腫瘤快速生長、血供不足時(shí)，其內(nèi)部常產(chǎn)生低氧現(xiàn)象。低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）是重要的轉(zhuǎn)錄因子，在低氧下調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的許多生物學(xué)行為，如生長、侵襲、血管生成、耐放化療等。本研究旨在闡明HIF-1α對(duì)NB生長、侵襲、去分化的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：首先我們構(gòu)建H

2、IF-1α過表達(dá)以及核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)干擾的慢病毒載體。用免疫組化測(cè)定臨床NB標(biāo)本中HIF-1α、Sonic Hedgehog（SHH）信號(hào)通路蛋白表達(dá)，并評(píng)價(jià)和腫瘤分期、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的關(guān)系。通過慢病毒載體轉(zhuǎn)染，使2種NB細(xì)胞（SH-SY5Y和IMR32細(xì)胞）的HIF-1α過表達(dá)或基因沉默，從而研究HIF-1α在NB增殖、遷移、侵襲中的作用，并運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase

3、 chain reaction，PCR）和Western blotting評(píng)價(jià)HIF-1α對(duì)SHH通路的調(diào)控作用。此外，建立裸鼠移植瘤模型，在體內(nèi)驗(yàn)證HIF-1α對(duì)NB細(xì)胞生長的影響。并通過流式細(xì)胞儀，從SH-SY5Y細(xì)胞中分選出側(cè)群（side population,SP）細(xì)胞和非側(cè)群細(xì)胞，比較兩者HIF-1α和SHH信號(hào)分子的差異。通過慢病毒轉(zhuǎn)染，使SP細(xì)胞HIF-1α過表達(dá)或沉默后，運(yùn)用Western blotting、免疫熒光、實(shí)

4、時(shí)熒光定量PCR評(píng)價(jià)HIF-1α對(duì)SP細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物(ABCG2，Oct4，c-kit）表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：HIF-1α和SHH信號(hào)分子SHH、 PTCH1、GLI1在NB標(biāo)本中的陽性率分別為57.7％、64.8%、46.5%、54.9%。Spearman相關(guān)分析顯示NB標(biāo)本中HIF-1α和SHH、GLI1的表達(dá)水平呈正相關(guān)，HIF-1α、SHH、GLI1的表達(dá)水平和腫瘤分期呈正相關(guān)。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者SHH、GLI1陽性率

5、更高，而分化差的腫瘤HIF-1α、GLI1的陽性率更高。Kaplan-Meier生存分析顯示HIF-1α或SHH陽性者較陰性者2年存活率更低。HIF-1α在常氧、低氧下均能促進(jìn)NB細(xì)胞侵襲，但僅在低氧下促進(jìn)其增殖和遷移。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting顯示，HIF-1α在轉(zhuǎn)錄水平正向調(diào)節(jié)NB細(xì)胞的SHH通路，進(jìn)而影響其蛋白表達(dá)。裸鼠移植瘤模型證實(shí)HIF-1α可在體內(nèi)促進(jìn)NB生長并調(diào)節(jié)SHH通路。SP細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志