電離輻射對小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞作用的基因表達譜研究.pdf

1、背景：早前在研究C60(OH)24-SLN-E的對小鼠輻射防護作用研究時，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過6 Gy60Co射線照后21天的小鼠小腸固有層細胞中的γ-H2AX foci數(shù)量遠多于小腸絨毛上皮細胞，這一現(xiàn)象提示兩種細胞在DNA修復(fù)能力上存在差異。
　　目的：探索小腸絨毛上皮細胞和固有層細胞在DNA損傷修復(fù)能力產(chǎn)生差異的分子機制，尋找治療腸型放射病的關(guān)鍵靶分子。
　　方法：⑴小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞在體外進行原代培養(yǎng)和傳代。再

2、將每種細胞各分為兩組，實驗組細胞經(jīng)過6Gy X線照射并修復(fù)6小時；對照組不照射。⑵細胞照射后6小時，用western blot檢測分析γ-H2AX的蛋白表達水平。⑶細胞照射后6小時，提取每個樣品的總RNA，合成標(biāo)記探針cDNA并與基因芯片進行雜交，通過芯片掃描獲得基因表達數(shù)據(jù)并進行差異基因篩選，進一步對差異基因進行GO分析和PATHWAY分析。
　　結(jié)果：①成功培養(yǎng)并獲得原代小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞。②X射線照射并修復(fù)6小

3、時后，小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞的γ-H2AX蛋白表達量都上升，但兩者之間沒有顯著的差別。③在參與DSB非同源末端連接和同源重組修復(fù)的基因表達中，兩種細胞有9個基因存在表達差異，包括POLM、XRCC5、FEN1、XRCC2、POLD3、POLD2、EME1、RAD54B和 BRCA2基因，且在小腸絨毛上皮細胞的表達都顯著高于固有層纖維細胞。照射后6小時，固有層纖維細胞中RAD54B表達明顯下調(diào)；除上述9個基因存在差異表達外，

4、RAD51和 RPA2也有差異表達，同樣在小腸絨毛上皮細胞的表達都顯著高于固有層纖維細胞。除此之外，受照后的兩種細胞中，參與細胞凋亡和細胞周期調(diào)控的部分基因也有表達差異。
　　結(jié)論：成功獲得了原代培養(yǎng)的小鼠小腸絨毛上皮細胞和固有層纖維細胞并用于基因表達差異的研究。研究發(fā)現(xiàn)，由于參與DNA非同源末端連接和同源重組修復(fù)相關(guān)蛋白明顯高表達，受照小鼠小腸絨毛上皮細胞DNA雙鏈斷裂修復(fù)能力明顯強于固有層纖維細胞，其中RAD54B基因的下調(diào)表