腸桿菌科細(xì)菌質(zhì)粒介導(dǎo)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性研究.pdf

1、[目的] 研究腸桿菌科細(xì)菌中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)及質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶菌株的分布。 [方法] 收集天津胸科醫(yī)院2004年臨床分離腸桿菌科細(xì)菌396株，以K-B法測定細(xì)菌對抗生素的敏感性；以NCCLS推薦紙片確證試驗(yàn)檢測其產(chǎn)ESBLs情況，以頭孢西丁試驗(yàn)粗篩產(chǎn)AmpC酶菌。以細(xì)菌接合試驗(yàn)輔助耐藥基因的定位。提取質(zhì)粒DNA作模板，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和多重PCR方法及序列分析確定ESBLs及質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的

2、基因型 [結(jié)果] 396株腸桿菌科細(xì)菌對氨芐西林耐藥率高達(dá)91.4％，一、二代頭孢菌素耐藥率高于40％，三代頭孢菌素中頭孢噻肟耐藥率達(dá)25.70％，慶大霉素耐藥率達(dá)26.5％，環(huán)丙沙星耐藥率達(dá)23.2％，復(fù)方磺胺耐藥率達(dá)31.8％，三耐以上的多重耐藥菌株達(dá)71.2％。其中產(chǎn)ESBLs菌株檢出率為25.0％(99/396)，疑似產(chǎn)AmpC酶菌株檢出率為16.9％(67/396)；產(chǎn)ESBLs菌株除對亞胺陪南仍保持較好的敏感性(9

3、9.0％)以外，對其他抗生素耐藥率均高于40％，青霉素類和一、二代頭孢菌素耐藥率均為100％，三代頭孢菌素中頭孢噻肟耐藥性最高，達(dá)79.6％。產(chǎn)ESBLs菌株接合試驗(yàn)陽性率為40.4％(40/99)，疑似產(chǎn)AmpC酶菌株接合試驗(yàn)陽性率為10.4％(7/67)，接合子藥敏試驗(yàn)證實(shí)供體菌的耐藥標(biāo)誌部分或全部傳遞給受體菌；以40株接合試驗(yàn)陽性的產(chǎn)ESBLs菌株的質(zhì)粒DNA為模板用PCR方法進(jìn)行基因分型，結(jié)果顯示TEM、SHV、CTX-M陽性率

4、分別為50.0％、20.0％和67.5％，產(chǎn)2種型別ESBLs的菌株達(dá)61.3％；對7株接合試驗(yàn)陽性疑似產(chǎn)AmpC酶菌株提取其質(zhì)粒DNA為模板，用PCR方法進(jìn)行基因分型，，結(jié)果有4株為DHA型陽性，其中2株菌同時產(chǎn)ESBLs，高度疑似為產(chǎn)超超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(SSBL)菌株。隨機(jī)抽取5株ESBLs擴(kuò)增陽性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列分析，其結(jié)果證實(shí)2株TEM型擴(kuò)增產(chǎn)物均屬TEM-1型，經(jīng)NCBI基因庫查詢和BLASTn比對，與奇異變形桿菌(AY

5、729027)注冊的相應(yīng)序列的核苷酸相似性分別為99.76％(835/837)、99.62％(847/851)，氨基酸相似性分別為100％、99.62％(259/260)；1株SHV型擴(kuò)增產(chǎn)物屬于SHV-12型，與弗勞地枸櫞酸桿菌(AY826418)注冊的相應(yīng)序列的核苷酸及氨基酸相似性均為100％；2株CTX-M型擴(kuò)增產(chǎn)物分屬CTX-M3、CTX-M14型，分別與弗勞地枸櫞酸桿菌(Y10278)、液化沙雷氏菌((AF462398)注冊的

6、相應(yīng)序列的核苷酸相似性為99.82％(534/536)、99.63(534/536)，氨基酸相似性為100％、99.45％(180/181)。 [結(jié)論] 腸桿菌科細(xì)菌抗生素耐藥性較嚴(yán)重，且呈多重耐藥模式；產(chǎn)ESBLs菌及疑似產(chǎn)AmpC酶菌占有重要地位，其耐藥性可通過接合傳遞；ESBLs基因分型以CTX-M型為主，其次為TEM型和SHV型，同時產(chǎn)2種以上酶菌株居多數(shù)，并發(fā)現(xiàn)可疑產(chǎn)超超廣譜酶(SSBL)菌株；其中CTX-M14、S