CXCR1-2拮抗劑G31P對(duì)獲得性大皰性表皮松懈癥皮膚損傷的影響.pdf

1、目的:獲得性大皰性表皮松懈癥(EpidermolysisbullosaacquisitaEBA)多數(shù)累及皮膚和黏膜表面，特別是口腔、鼻、咽、喉粘膜和結(jié)膜處出現(xiàn)紅腫瘙癢，形成水皰、糜爛、疤痕等。EBA患者血循環(huán)中含有針對(duì)Ⅶ型膠原蛋白（COL-7）的自身循環(huán)IgG抗體，皮損部位的組織病理學(xué)檢查顯示病損部位真表皮分離，真表皮基底膜處有IgG抗體、C3補(bǔ)體的線性沉積，表皮下存在以嗜中性粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤。EBA模型小鼠主要在眼周、口唇周圍

2、、四肢軀干、尾部等部位發(fā)病，出現(xiàn)水皰、糜爛、疤痕等癥狀。本課題在成功建立EBA模型小鼠后，將其分成兩組，分別在預(yù)定的時(shí)間注射G31P或NS。通過比較G31P組和NS組EBA模型小鼠的區(qū)別，觀察CXCR1/2拮抗劑G31P是否能夠抑制獲得性大皰性表皮松懈癥模型小鼠的皮膚損傷，是否能夠緩解EBA模型小鼠的炎癥，對(duì)EBA治療提供理論依據(jù)。
　　方法:G31P配制:取1mgG31P粉末，加10mlNS配制成10μg/100μl的工作濃度溶

3、液，每只小鼠注射10μg/20g（即100μl/只）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:取Balb/c小鼠20只，分為兩組，每組各10只，分別為G31P組（雌雄各5只）、NS組（雌雄各5只）。動(dòng)物模型建立:將GST-mCol7c和弗式完全佐劑(FCA)主動(dòng)免疫兔子，提取血清后，純化，得到致病性IgG抗體(P-IgG)，被動(dòng)免疫Balb/c小鼠。實(shí)驗(yàn)第1、3、6、8、10天，G31P組注射G31P，NS組注射NS，實(shí)驗(yàn)第2、4、7天，兩組均注射P-IgG（德

4、國呂貝克大學(xué)皮膚病實(shí)驗(yàn)室贈(zèng)送）。檢測方法:實(shí)驗(yàn)第5、9天，EBA模型小鼠尾靜脈取外周血、尾部末端取皮膚分別用于FACS(Gr-1)、IF/IHC。實(shí)驗(yàn)第11天，對(duì)小鼠的皮膚破損程度評(píng)分，第12天，解剖小鼠，取小鼠各臟器待用。外周血靜置后取血清，用于流式細(xì)胞術(shù)微球陣列法FACS(CBA)檢測細(xì)胞因子;耳部組織一部分室溫存放在福爾馬林中用于HE染色，另一部分放在空EP管內(nèi)-80℃凍存用于直接免疫熒光(IF);病損部位的皮膚室溫存放在福爾馬林

5、中用于HE染色;脾組織用于FACS(Gr-1、T/B)。
　　結(jié)果:
　　1.G31P組和NS組大體觀察結(jié)果顯示，兩組均在耳部、眼周、尾部皮膚出現(xiàn)大皰、糜爛、疤痕等癥狀，但G31P組較NS組更晚出現(xiàn)癥狀且G31P組癥狀較NS組有所緩解;
　　2.G31P組EBA模型小鼠的皮損部位評(píng)分低于NS組(P＜0.05);
　　3.HE染色結(jié)果顯示，NS組EBA模型小鼠病損部位（尾部、眼周、耳部）皮膚真表皮明顯分離，表皮下可

6、見以嗜中性粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞大量浸潤，而G31P組EBA模型小鼠病損部位皮膚真表皮分離不明顯，表皮下可見少量炎性細(xì)胞浸潤;
　　4.直接免疫熒光檢測結(jié)果顯示，G31P組和NS組均可見真表皮的分離，表皮下IgG和C3的線性沉積，熒光強(qiáng)度分析結(jié)果顯示，P＞0.05，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　5.流式細(xì)胞術(shù)檢測兩組小鼠外周血Gr-1，第5天兩組結(jié)果顯示輕微差別(P＞0.05)，第9天NS組明顯高于G31P組(P＜0.05);

7、>　　6.流式細(xì)胞術(shù)檢測兩組小鼠脾組織Gr-1、CD3、CD9表達(dá)，兩組結(jié)果(P＞0.05)未見顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1.G31P可以明顯減輕EBA模型小鼠的皮膚損傷癥狀;
　　2.G31P可以減少EBA模型小鼠表皮下炎性細(xì)胞浸潤，緩解病損部位真表皮分離;
　　3.G31P可以減少EBA模型小鼠外周血中性粒細(xì)胞數(shù)量，但是對(duì)脾臟內(nèi)的中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞及B細(xì)胞數(shù)量沒有影響;
　　4.G31P對(duì)表皮下Ig