博爾納病病毒磷蛋白對神經(jīng)細胞增殖和酪氨酸羥化酶表達的影響.pdf

1、背景和目的：博爾納病病毒（Borna Disease Virus，BDV）是一種嗜神經(jīng)性、單股負鏈RNA病毒，其宿主可能包括馬和羊等所有溫血動物。目前研究表明BDV感染可能與人類神經(jīng)精神疾病相關(guān)，但確切關(guān)系和發(fā)病機制不清，一直是近年來研究的焦點之一。BDV磷蛋白（phosphoprotein，P24）在感染動物的腦組織中含量豐富，是BDV核糖核蛋白體的中心蛋白，在病毒感染過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過建立持續(xù)表達BDV P24的細胞模型

2、，初步探討B(tài)DV P24對PC-12細胞增殖和酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）表達的影響，為進一步研究BDV的致病機制提供依據(jù)。 方法： 1.用陽離子脂質(zhì)體方法將含有BDV P24基因的真核表達質(zhì)粒pEGFP-N1-P24轉(zhuǎn)染到神經(jīng)源性的PC-12細胞中，經(jīng)G418篩選得到穩(wěn)定表達細胞模型，用熒光顯微鏡和RT-PCR鑒定BDV P24在PC-12細胞內(nèi)的表達。 2.觀察轉(zhuǎn)染pEGFP

3、-N1-P24的細胞與轉(zhuǎn)染pEGFP-N1空質(zhì)粒對照和未轉(zhuǎn)染細胞的形態(tài)學變化，用MTT檢測上述各組細胞增殖活性的變化，用免疫熒光和Fluorescent real-time PCR的方法檢測TH在各組細胞中的表達。 結(jié)果： 1.成功建立持續(xù)表達BDV P24的細胞模型。用熒光顯微鏡觀察可見BDV P24主要表達在細胞核內(nèi)；PCR結(jié)果顯示只有穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-P24的細胞轉(zhuǎn)錄BDV P24片段，轉(zhuǎn)染pEGFP-N1

4、空質(zhì)粒的細胞和未轉(zhuǎn)染的細胞內(nèi)均沒有。 2.BDV P24抑制PC-12細胞的增殖。用MTT的方法檢測三組細胞的增殖活性，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-P24的細胞增殖活性最差，其次為轉(zhuǎn)染pEGFP-N1空質(zhì)粒的細胞，而未轉(zhuǎn)染的細胞增殖活性不受影響，差異具有統(tǒng)計學意義。 3.BDV P24促進TH的表達。用免疫熒光和real-time PCR的方法檢測TH的表達，結(jié)果一致顯示TH在轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-P24的細胞中表達量