肝缺血再灌注后HSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)及其與凋亡關(guān)系的臨床研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)肝組織在缺血再灌注后HSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)及細(xì)胞凋亡情況，探討肝組織對(duì)缺血再灌注的反應(yīng)及HSP70與肝細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。為選用有效的預(yù)處理方法、抑制細(xì)胞凋亡、減輕肝臟缺血再灌注損傷(HIRI)提供理論基礎(chǔ)。 方法：1、標(biāo)本采集：術(shù)前、手術(shù)結(jié)束時(shí)、術(shù)后第一、四、七天各取外周靜脈血10ml，離心取上層血清；術(shù)中在肝門阻斷前、肝門阻斷后開(kāi)放時(shí)和手術(shù)結(jié)束關(guān)腹前各取切緣旁肝組織10克，用于石蠟包埋切片。2、實(shí)驗(yàn)方

2、法：原位雜交法檢測(cè)肝組織中HSP70 mRNA的表達(dá)；S-P免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肝組織中}tSP70的表達(dá)；脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)肝細(xì)胞的凋亡情況；ELISA法測(cè)定血清中HSP70的表達(dá)情況；自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肝功能。 結(jié)果：1、肝門阻斷前肝組織HSP70 mRNA在每高倍視野下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為1.90±0.84，肝門開(kāi)放時(shí)為24.4±5.7，關(guān)腹前為35.7±5.7，三組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較差異有統(tǒng)

3、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2、肝門阻斷前肝組織HSP70在每高倍視野下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為O，肝門開(kāi)放時(shí)為18.8±4.4，關(guān)腹前為28.9±6.2；三組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肝門阻斷前HSP70灰度差值為0.1609±0.1558，肝門開(kāi)放時(shí)為0.3409±0.3694，關(guān)腹前為0.5896±0.1802；三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

4、<0.05)，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3、肝門阻斷前肝細(xì)胞凋亡指數(shù)為(11.4±2.4)‰，肝門開(kāi)放時(shí)為(8.8±1.7)‰，關(guān)腹前為(8.6±1.6)‰。肝門阻斷前肝細(xì)胞的凋亡指數(shù)高于肝門開(kāi)放時(shí)肝細(xì)胞的凋亡指數(shù)(P<0.05)、高于關(guān)腹前肝細(xì)胞的凋亡指數(shù)(P<0.05)，肝門開(kāi)放時(shí)肝細(xì)胞的凋亡指數(shù)高于關(guān)腹前肝細(xì)胞的凋亡指數(shù)(P<0.05)。4、術(shù)前血清HSP70光密度值為1.6l±0.24，手術(shù)結(jié)束關(guān)腹時(shí)為1.58±

5、0.2l，術(shù)后第一天為1.66±0.26，術(shù)后第四天為1.74±0.27，術(shù)后第7天為1.68±0.24，各時(shí)間點(diǎn)的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5、患者肝功能生化分析各組的ALT和AST在各時(shí)間點(diǎn)的變化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：1、在肝組織中幾乎無(wú)HSP70 mRNA和HSP70的表達(dá)，術(shù)中肝缺血再灌注后的肝組織中HSP70 mRNA及HSP70均有較高的表達(dá)，且呈上升趨勢(shì)，提示HSP70與HIRI的發(fā)生和