牡丹組培離體再生系統(tǒng)的建立.pdf

1、本文以牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)單瓣品種‘鳳丹白’為主要試材，初步建立了牡丹組培離體再生系統(tǒng)。 實(shí)驗(yàn)測(cè)定了不同花型品種葉片間及‘鳳丹白’5種不同類型外植體(幼葉、成齡葉、幼莖、暗處理葉片、子葉)間總酚含量和PPO活性，分析了總酚含量、PPO活性與外植體褐化的關(guān)系；通過不同的消毒、預(yù)處理、培養(yǎng)基類型和培養(yǎng)條件的選擇，對(duì)牡丹幼葉初始培養(yǎng)的褐變進(jìn)行了研究；以幼葉、未木質(zhì)化葉柄、子葉為外植體，研究了培養(yǎng)基類

2、型、激素種類及濃度配比、碳源、培養(yǎng)條件等因素對(duì)牡丹組培離體再生系統(tǒng)建立的影響；研究了不同培養(yǎng)基組分對(duì)成熟胚直接誘導(dǎo)叢生芽“玻璃化”程度的影響；以休眠側(cè)芽為外植體比較了60個(gè)牡丹品種的擴(kuò)繁能力。 研究結(jié)果如下： (1)確定了牡丹初始培養(yǎng)的較佳外植體類型。不同品種間或同一品種的不同類型外植體間，總酚含量、PPO活性、初始外植體褐化率差異顯著。子葉和幼莖的總酚含最、PPO活性較其它類型外植體低，是初始培養(yǎng)最佳的外植體。

3、 (2)篩選了有效降低外植體褐變的技術(shù)措施。外植體經(jīng)過濃度為10％的次氯酸鈉(有效氯1％)消毒10min后，用無菌的抗氧化劑預(yù)處理液(MS+150mg/L檸檬酸+100mg/L抗壞血酸，pH4.5)對(duì)外植體進(jìn)行30min預(yù)處理，以WPM作為基本培養(yǎng)基，輔加500mg/LPVP或15mg/LVc，在弱光、較低的溫度(18～20℃)培養(yǎng)，可有效減輕外植體的褐變。 (3)篩選出牡丹離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基類型。誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為WPM

4、培養(yǎng)基，添加2,4-D0.5mg/L+TDZ0.5mg/L或2,4-D1mg/L+TDZ1mg/L的激素組合。利用來源于子葉的愈傷組織進(jìn)行不定芽分化的培養(yǎng)基為WPM+0.5mg/LTDZ。以成熟胚為外植體直接誘導(dǎo)叢生芽的最佳培養(yǎng)基為WPM+6-BA2.5mg/L+2,4-D0.1mg/L。生根最佳培養(yǎng)基為1/2WPM+2mg/LIBA。在低溫、暗培養(yǎng)條件下處理10天，在生根前進(jìn)行5周壯苗處理，有利于提高無根苗的生根率。移苗前打開瓶蓋煉苗

5、3～5天，培養(yǎng)室內(nèi)保持溫度嚴(yán)格控制在25℃±1℃，濕度大于80％，可使幼苗移栽成活率達(dá)到80％以上。 (4)解決了牡丹叢生芽誘導(dǎo)后的“玻璃化”現(xiàn)象。在WPM培養(yǎng)基中添加NAA0.1mg/L+6-BA1mg/L，選用7g/L瓊脂可有效改善叢生芽的“玻璃化”現(xiàn)象。 (5)牡丹基因型的差異是影響離體擴(kuò)繁的主要原因。以休眠側(cè)芽為外植體，通過對(duì)60個(gè)牡丹品種間的擴(kuò)繁能力比較，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)繁能力的大小取決于基因型。不同品種間擴(kuò)繁能力差異顯