地中海貧血的產(chǎn)前篩查與診斷的實驗研究.pdf

1、背景和目的：地中海貧血(thalassemia，簡稱地貧)是人群中最常見的不完全顯性的慢性溶血性貧血病，雖屬單基因遺傳，但所涉及的α、β珠蛋白基因表達(dá)調(diào)控復(fù)雜并具有只在紅系造血細(xì)胞中表達(dá)的較高組織特異性，需要精確調(diào)控以保證α/β珠蛋白合成比趨向平衡，而且需要的表達(dá)量很大，使治療困難。無明顯癥狀的地貧攜帶人群婚配就可能孕育地貧純合子或雙重雜合子，α或β珠蛋白的兩個基因位點都受到影響而出現(xiàn)中、重型地貧患兒，呈珠蛋白合成障礙的進(jìn)行性致死性貧血

2、，給社會和家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。 重慶市屬地貧高發(fā)區(qū)，地貧產(chǎn)前遺傳篩查就是針對無明顯貧血癥狀的攜帶者人群，即檢出隱性地貧孕婦，對夫婦雙方均為地貧基因雜合子進(jìn)行產(chǎn)前咨詢和產(chǎn)前診斷有很好的預(yù)測作用，并提供了可選擇的手段，從而實現(xiàn)婚育監(jiān)控、預(yù)防中度地貧、杜絕重型地貧患兒。本研究通過分析孕婦、配偶乃至胎兒血液學(xué)指標(biāo)與地貧各基因型間的關(guān)系，建立地貧常規(guī)的產(chǎn)前篩查和基因診斷方法，對妊娠三個月后胎兒的中、重型地中海貧血進(jìn)行產(chǎn)前實驗

3、診斷，降低圍生兒出生缺陷，確保母胎健康和出生質(zhì)量，提高人口素質(zhì)。 方法：在本院所有產(chǎn)前檢查人群中進(jìn)行廣泛的血液學(xué)常規(guī)檢查，紅細(xì)胞參數(shù)異常者進(jìn)一步血清鐵、血紅蛋白電泳分析，陽性病例進(jìn)行跨斷裂點聚合酶鏈反應(yīng)(gap-PCR)、反向斑點雜交(PCR-RDB)檢測珠蛋白基因，確診地貧后查配偶紅細(xì)胞參數(shù)、基因分析；夫婦攜帶地貧基因則抽取臍帶血或羊水快速對胎兒基因型做出明確的產(chǎn)前診斷，適時終止妊娠，降低圍生期母胎風(fēng)險；疑似β地貧夫婦行β基因

4、突變熱點測序、比對，探測可能存在的未知突變。 結(jié)果： (1)篩查2310例孕婦，確診α地貧11例、β地貧58例、α/β雜合子3例、β/β雜合子1例，夫婦分別患α、β地貧2對，同患α地貧1對、β地貧2對；重型地貧患兒2例，引產(chǎn)后再次行臍血基因診斷，符合率為100％；本次篩查人群α地貧發(fā)生率0.61％(11十3/2310)、β地貧發(fā)生率2.68％(58+3+1/2310)； (2)紅細(xì)胞參數(shù)平均血紅蛋白(MCH)在各

5、基因型之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；血紅蛋白(Hb)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)在α、β(α地貧復(fù)合β地貧雜合子)、β三者兩兩之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但三者與β/β(β地貧雙重雜合子)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、血紅蛋白A2(HbA2)在α、α/β、β三者與β/β差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，且RDW在α、α/β與β間有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，HbA

6、2在α與β之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)； (3)β地貧以CD41/42(-CTTT)、IVS-II-654(C→T)、CD17(A→T)、CD26(G→A)最常見，其次為CD71/72(+A)、CD27-28(+C)；α地貧多見--SEA/aa，非缺失型ααcs、ααQS也不少； (4)疑似β地貧的15個樣本中，11個出現(xiàn)2～5個CD2、IVS-II-16、IVS-II-74、IVS-II-654、IVS-II-

7、666多態(tài)性位點(SNP)，IVS-II-654C→T的SNP能引起剪切突變型β°地貧，此類樣本再次PCR-RDB見突變探針顯色，補充診斷為IVS-II-654雜合子。 結(jié)論： (1)紅細(xì)胞參數(shù)和定量血紅蛋白電泳是篩查地貧的重要指標(biāo)，產(chǎn)檢孕婦進(jìn)行必要的、系統(tǒng)的血液學(xué)篩查是監(jiān)控同型地貧夫婦孕育、杜絕重癥地貧兒的首要措施； (2)gap-PCR、PCR-RDB、基因測序可快速明確母胎地貧基因型，有效干預(yù)地貧出生缺陷；