罕見地中海貧血規(guī)范化基因診斷臨床評價及一種地中海貧血新突變基因的鑒定.pdf

1、第一章罕見地中海貧血規(guī)范化基因診斷臨床評價
　　目的：(1)對廣東省婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心目前的罕見地貧規(guī)范化基因診斷流程進(jìn)行效果評價，為其進(jìn)一步臨床推廣與實(shí)施提供依據(jù)；(2)初步了解廣東省罕見地貧基因分子流行病學(xué)情況。
　　方法：(1)回顧分析2013年1月至2015年6月廣東省婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心罕見地貧基因診斷情況。規(guī)范診斷流程為：對表現(xiàn)為MCV≤82fl且HbA2≤2.5％的標(biāo)本進(jìn)行--FIL，--THAI和α-珠

2、蛋白基因測序分析；對MCV≤82fl且HbA2≥3.5%的標(biāo)本進(jìn)行β珠蛋白基因測序分析；對HbF增高的標(biāo)本進(jìn)行Yunnanese(Aγδβ)0、ChineseGγ(Aγδβ)0和SEA-HPFH檢查；對異常血紅蛋白的標(biāo)本進(jìn)行α/β珠蛋白基因測序檢查。將338例研究對象分為規(guī)范診斷組(209例)與未規(guī)范診斷組(129例)，比較兩組的陽性率；對未規(guī)范診斷組不規(guī)范的原因加以分析，發(fā)現(xiàn)存在的問題，找出病因；采用SPSS13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析

3、；(2)對2011年廣東省地中海貧血流行性現(xiàn)況基線調(diào)查樣本進(jìn)行罕見地貧基因檢測，共從14332個家庭中采集了男性外周血13148份，其中15.9%常規(guī)地貧基因檢測為陽性，我們對余下血液學(xué)初篩陽性，而常規(guī)基因檢查呈陰性的進(jìn)行罕見地貧基因型的分析。根據(jù)血常規(guī)及血紅蛋白電泳結(jié)果，對研究對象進(jìn)行分類：α-地貧特征組(MCV≤82fl且HbA2≤2.5%)，β-地貧特征組(MCV≤82fl且HbA2≥3.5%)，HbF增高組(HbF≥5.0%)，

4、異常血紅蛋白組。按罕見地貧基因規(guī)范化診斷流程進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：(1)規(guī)范診斷組確診陽性率顯著高于未規(guī)范診斷組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)；(2)檢測項(xiàng)目的錯檢、漏檢及不合指征是造成未規(guī)范檢查的主要原因，導(dǎo)致醫(yī)療資源的浪費(fèi)和確診陽性率的下降；(3)漏檢錯檢項(xiàng)目反應(yīng)了醫(yī)務(wù)人員對罕見地貧基因的檢測項(xiàng)目與臨床癥狀的相關(guān)性理論知識掌握有偏頗，可能存在宣傳與培訓(xùn)不足的問題；(4)基線調(diào)查中，α-地貧特征組檢出了4例陽性，檢出率為4

5、/200(2%)；β-地貧特征組檢出了9例陽性，檢出率為9/28(32.14%),；HbF增高組檢出了4例陽性，檢出率為21.05%(4/19)；異常血紅蛋白的檢出率為43/43(100%)，總共額外增加了60例地貧基因陽性，檢出率為20.69%，包括--THAI/2例，突變型α-地貧2例，ChineseGγ(Aγδβ)01例，SEA-HPFH3例，突變型β-地貧9例，HbQ-Thailand11例，HbNewYork18例，HbG-C

6、hinese6例，HbJ-Bangkok6例，另外還有HbJ-Baltimore和HbOkayama各1例。
　　結(jié)論：(1)我院罕見地中海貧血的規(guī)范化基因診斷的制定與實(shí)施臨床應(yīng)用效果良好，可降低漏診誤診率，顯著提高醫(yī)療質(zhì)量。在以后推廣的過程中，應(yīng)注意加強(qiáng)醫(yī)務(wù)人員的學(xué)習(xí)與簡化流程，使罕見地貧基因診斷流程能更好地服務(wù)臨床；(2)雖然本研究的樣本量不足以分析罕見地貧基因的攜帶率，但是我們希望提供一個較大樣本中這些罕見地貧基因型的檢出情

7、況，為以后全省罕見地貧基因攜帶率調(diào)查的樣本估算等打下基礎(chǔ)；(3)本研究發(fā)現(xiàn)了2例中國人群首次報道的罕見的異常血紅蛋白類型：HbJ-Baltimore和HbOkayama，豐富了中國人群異常血紅蛋白基因的種類。
　　第二章一種地中海貧血的新突變基因鑒定
　　目的：目前已有50余種缺失型α-地貧類型被報道，缺失范圍從2.4kb到整個α-珠蛋白基因簇不等。本研究擬對一例新發(fā)現(xiàn)的導(dǎo)致α0-地貧的44.6kb缺失突變家系進(jìn)行基因型鑒定

8、。
　　方法：采集臨床上一例表型為α0-地貧但α-珠蛋白基因常見缺失與突變檢測及第一章提及的罕見地貧基因診斷-檢測均提示為陰性的先證者及其家庭成員的外周血。采用MLPA方法檢測珠蛋白基因拷貝數(shù)變化。為了更好地描述斷裂位點(diǎn)，我們針對α-珠蛋白基因簇基于Agilent的芯片技術(shù)定制了一款CustomCGH芯片。根據(jù)CGH結(jié)果設(shè)計Gap-PCR引物，將擴(kuò)增的特異DNA片段進(jìn)行Sanger測序分析。
　　結(jié)果：MLPA分析α-珠蛋白

9、基因拷貝數(shù)，發(fā)現(xiàn)先證者存在大片段缺失，無法確定斷裂位點(diǎn)。CustomCGH結(jié)果顯示先證者16號染色體發(fā)生大片段缺失，缺失區(qū)域?yàn)?hg19)chr16:194277-237673。通過Gap-PCR和Sanger測序驗(yàn)證確定，缺失區(qū)域?yàn)椋?hg19)chr16:194214-238840，缺失大小為44627bp。對家系其他成員分析，推測大片段缺失遺傳自父親，家系其他成員未攜帶該基因。該缺失片段移除了α-珠蛋白基因簇上的所有功能基因，使α