吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌的臨床療效和預(yù)測(cè)因素分析及其致肺纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：(1)評(píng)價(jià)吉非替尼治療中晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的療效。(2)檢測(cè)接受吉非替尼治療的中晚期NSCLC患者腫瘤組織標(biāo)本中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酪氨酸激酶區(qū)域、K-RAS基因的突變情況以及P16基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)，分析EGFR、K-RAS基因突變、P16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與吉非替尼療效之間的關(guān)系。(3)探討吉非替尼對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化模型的影響及其作用機(jī)制。 方法：(1)29例經(jīng)病理證實(shí)的中晚期N

2、SCLC患者，口服吉非替尼250mg/日治療，療效評(píng)價(jià)采用RECIST標(biāo)準(zhǔn)。(2)回顧性收集29例患者的石蠟?zāi)[瘤組織標(biāo)本，提取組織標(biāo)本的DNA，PCR方法擴(kuò)增EGFR基因18-21外顯子、K-RAS基因外顯子2，甲基化特異性PCR方法擴(kuò)增P16基因啟動(dòng)子區(qū)，擴(kuò)增結(jié)果行測(cè)序檢測(cè)EGFR基因和K-RAS基因的突變情況以及P16基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平，分析EGFR、K-RAS基因突變、P16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與吉非替尼療效之間的關(guān)系。(3)

3、將C57BL/6小鼠分為四組：鹽水+鹽水組，鹽水+吉非替尼組，博萊霉素+鹽水組，博萊霉素+吉非替尼組。經(jīng)氣管滴注博萊霉素的方法誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型的形成。分別于14天和21天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)取小鼠標(biāo)本進(jìn)行分析。采用HE染色、MASSON染色和p-EGFR、S100A4的免疫組化染色對(duì)小鼠標(biāo)本行病理學(xué)評(píng)價(jià)，使用實(shí)時(shí)定量PCR的方法分析小鼠標(biāo)本中E-cadherin、CollagenⅠ、CollagenⅢ的含量以及western blot的方法測(cè)

4、定p-EGFR、S100A4和β-actin的蛋白量表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)本研究中共有29例經(jīng)病理證實(shí)的中晚期NSCLC患者接受吉非替尼口服治療，患者的客觀腫瘤緩解率為37.9％，疾病控制率為72.4％，平均無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)為10.0個(gè)月，平均總體生存期(OS)為16.8個(gè)月，1年生存率為51.7％。吉非替尼的療效與患者的性別、病理類(lèi)型及吸煙情況顯著相關(guān)(P＜0.05)。共有23例(79.3％)患者出現(xiàn)吉非替尼治療的副作

5、用，副作用主要表現(xiàn)為Ⅰ/Ⅱ度的皮疹(65.5％)和腹瀉(27.6％)，入組的29例患者無(wú)一例發(fā)生間質(zhì)性肺炎等嚴(yán)重并發(fā)癥。(2)患者腫瘤組織標(biāo)本的突變檢測(cè)發(fā)現(xiàn)11例患者(37.9％)攜帶有EGFR基因突變，4例患者(13.8％)帶有K-RAS基因突變．EGFR基因突變與患者的吉非替尼治療療效之間呈正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)，對(duì)患者吉非替尼治療后總體生存期的延長(zhǎng)有顯著性意義。K-RAS基因突變與患者吉非替尼療效之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P＜0.05

6、)，對(duì)患者吉非替尼治療后無(wú)進(jìn)展生存期和總體生存期的縮短有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在P16基因的甲基化檢測(cè)中，15例患者(55.6％)被檢測(cè)到有P16基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化，但P16基因的甲基化水平與患者的臨床特征及吉非替尼療效之間沒(méi)有相關(guān)關(guān)系。(3)HE染色與MASSON染色結(jié)果顯示：鹽水+吉非替尼組的病理表現(xiàn)與鹽水+鹽水組相似，吉非替尼沒(méi)有誘導(dǎo)出明顯的肺纖維化表現(xiàn)；博萊霉素+鹽水組的肺纖維化程度高于博萊霉素+吉非替尼組。免疫組化染色結(jié)果顯示：博萊

7、霉素+吉非替尼組的p-EGFR和S100A4的表達(dá)量低于博萊霉素+鹽水組。實(shí)時(shí)定量PCR分析結(jié)果表明，鹽水+吉非替尼組的膠原Ⅰ和膠原Ⅲ的含量與鹽水+鹽水組無(wú)差異；博萊霉素+鹽水組膠原Ⅰ和膠原Ⅲ的表達(dá)量在21天時(shí)明顯增高；而與博萊霉素+鹽水紐相比，博菜霉素+吉非替尼組的膠原Ⅰ和膠原Ⅲ的含量呈下降趨勢(shì)，E-cadherin在各組間的表達(dá)量沒(méi)有顯著性差異。western blot分析結(jié)果表明，β-actin的表達(dá)量在各組間無(wú)差異；鹽水+鹽水組

8、與鹽水+吉非替尼組p-EGFR和S100A4的表達(dá)量無(wú)差異；博萊霉素+吉非替尼組p-EGFR蛋白表達(dá)水平低于博萊霉素+鹽水組，博萊霉素+吉非替尼組S100A4的表達(dá)量與博萊霉素+鹽水組差異不明顯。 結(jié)論：(1)吉非替尼對(duì)于二線化療失敗的中晚期NSCLC患者有效且患者耐受性較好。(2)EGFR基因突變與患者吉非替尼的療效有正相關(guān)關(guān)系。K-RAS基因突變與患者吉非替尼的療效呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。P16基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化與患者吉非替尼療效