塞來昔布聯(lián)合吉非替尼在非小細胞肺癌中的實驗研究.pdf

1、目的：本研究通過觀察塞來昔布聯(lián)合吉非替尼分別對表皮生長因子受體(EGFR)突變細胞株(HCC827)和 EGFR野生型細胞株(A549)的增殖和凋亡的影響，探討塞來昔布聯(lián)合吉非替尼是否對非小細胞肺癌細胞系具有協(xié)同殺傷作用及與 EGFR基因狀態(tài)之間的相關(guān)性；并通過 Western blot檢測 COX-2和p-EGFR相關(guān)蛋白的表達，對其機制進行初步探討；從而為臨床上塞來昔布與吉非替尼的聯(lián)合使用提供依據(jù)，為晚期非小細胞肺癌患者的個體化治療

2、提供更完善的方案。
　　方法：塞來昔布、吉非替尼單獨及聯(lián)合干預(yù)兩種細胞系48h后，四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測定細胞生長抑制率；AlinexinV/PI法檢測細胞凋亡率；Western blot法檢測 p-EGFR和 COX-2蛋白表達。實驗數(shù)據(jù)以 x±S表示，用 SPSS17.0軟件進行方差分析，檢驗水準α=0.05。
　　結(jié)果：1.四甲基偶氮唑鹽(MTT法)檢測藥物分別對兩種細胞生長的抑制作用：不同濃度的塞來昔布和吉非替

3、尼單獨或聯(lián)合干預(yù)兩種細胞48h后，MTT法檢測細胞生長抑制率提示兩者對 HCC827、A549細胞的殺傷效應(yīng)呈劑量依賴性。HCC827細胞不同濃度聯(lián)合用藥組的細胞生長抑制率均大于單獨用藥組的細胞生長抑制率(P<0.05)；但 A549細胞低濃度聯(lián)合用藥組的細胞生長抑制率與單獨用藥組的細胞生長抑制率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但高濃度聯(lián)合時聯(lián)合用藥組的細胞生長抑制率大于單獨用藥組的細胞生長抑制率(P<0.05)。
　　2.

4、流式細胞術(shù)檢測藥物對細胞凋亡的影響：HCC827細胞正常對照組的早期凋亡率為(0.26±0.10)％，10umol/L塞來昔布聯(lián)合10umol/L吉非替尼處理細胞48h后，可見(39.22±3.67)%的細胞凋亡，明顯高于10umol/L塞來昔布、10umol/L吉非替尼單獨用藥的細胞凋亡率(9.71±0.94、21.54±1.98)%；但對于 A549細胞，正常對照組的早期凋亡率為(0.84±0.10)%，10umol/L塞來昔布聯(lián)合

5、10umol/L吉非替尼處理細胞48h后，可見(4.92±0.36)%的細胞凋亡，與10umol/L塞來昔布、10umol/L吉非替尼單獨用藥的細胞凋亡率(1.88±0.53、4.77±0.55)%之間差異無顯著性(P＜0.05)。提高用藥濃度后，我們發(fā)現(xiàn)80umol/L塞來昔布聯(lián)合40umol/L吉非替尼處理細胞48h后，可見(25.91±4.08)%的細胞凋亡，明顯高于80umol/L塞來昔布、40umol/L吉非替尼單獨用藥的細胞

6、凋亡率(6.30±1.02、18.46±1.92)%。
　　3.Western blot法檢測藥物對細胞 COX-2、p-EGFR蛋白的影響：兩種細胞中 COX-2和 p-EGFR均有表達。80umol/L塞來昔布、40umol/L吉非替尼及兩藥聯(lián)合分別作用于兩種細胞后，與單藥組相比，兩藥聯(lián)合組可顯著下調(diào) COX-2、p-EGFR蛋白的表達(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1.在 EGFR基因突變型細胞株 HCC827中，塞來昔