革蘭陰性菌中16S rRNA甲基化酶基因的檢測.pdf

1、目的：了解大連地區(qū)臨床分離革蘭陰性菌中介導(dǎo)高水平氨基糖苷類抗生素耐藥的16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB的流行情況并研究其耐藥機(jī)制。 方法：收集臨床分離的耐阿米卡星的無重復(fù)革蘭陰性桿菌134株（包括56株鮑曼不動桿菌、29株大腸埃希菌、35株肺炎克雷伯菌、4株銅綠假單胞菌、3株產(chǎn)氣腸桿菌、2株陰溝腸桿菌和5株黏質(zhì)沙雷氏菌）。PCR方法篩選2種甲基化酶基因armA及rmtB； PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序。對陽性菌進(jìn)行質(zhì)粒提取，

2、接合試驗(yàn)及轉(zhuǎn)化試驗(yàn)確定armA及rmtB基因定位。瓊脂稀釋法測定陽性菌株、結(jié)合子和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物DH5a（pMDarmA）對阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素3種氨基糖苷類抗生素的MIC值。 結(jié)果：134株耐藥菌株中，21（37．5%）株鮑曼不動桿菌檢出armA基因，5（17．2%）株大腸埃希菌和5（14．3%）株肺炎克雷伯菌檢出rmtB基因。質(zhì)粒抽提試驗(yàn)及接合試驗(yàn)中，21株armA陽性鮑曼不動桿菌均未獲成功，有7株rmtB陽性菌獲得成功且