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1、目的:研究Orexin-1受體(OX1R)對(duì)于戊四氮(PTZ)慢性點(diǎn)燃大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力,并通過(guò)免疫熒光的方法研究它對(duì)于海馬齒狀回神經(jīng)細(xì)胞增殖的影響。
方法:將健康的雄性wistar大鼠(體重180~220g)60只,隨機(jī)分為非致癇組:即空白對(duì)照組(NS+NS組),給予腹腔和側(cè)腦室都注射生理鹽水(Normalsaline,NS);致癇組:致癇組我們?cè)匐S機(jī)分成四個(gè)組:1)戊四氮加NS組(PTZ+NS組):給予腹腔內(nèi)和側(cè)腦室
2、分別注射PTZ及NS;2)戊四氮加Orexin-A組(PTZ+OXA組):給予腹腔內(nèi)注射PTZ和側(cè)腦室內(nèi)注射Orexin-A(OXA);3)戊四氮加OX1R拮抗劑(SB334867)組(PTZ+SB組):給予腹腔內(nèi)注射PTZ和側(cè)腦室內(nèi)注射SB334867;4)戊四氮加SB334867和Orexin-A組(PTZ+SB+OXA組):給予腹腔內(nèi)注射PTZ和側(cè)腦室內(nèi)注射SB334867和Orexin-A。每天早晨我們給予非致癇組及致癇組的大鼠
3、腹腔注射相同劑量的NS或者PTZ(35mg·kg-1),觀察各組的大鼠出現(xiàn)癲癇的潛伏期、癲癇發(fā)作的持續(xù)時(shí)間、癲癇發(fā)作的等級(jí)和死亡百分比等行為學(xué)變化。連續(xù)注射30d。取造模成功的大鼠在大鼠腦立體定位儀的指導(dǎo)下給予側(cè)腦室微導(dǎo)管植入,手術(shù)恢復(fù)7天后各組大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。根據(jù)不同的分組,于每天水迷宮前分別側(cè)腦室內(nèi)注射8μl生理鹽水、8μlOrexin-A(14μg·8μl-1)或8μl SB334867(6μg·8μl-1),通過(guò)Morris水迷宮
4、觀察各組大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力以及通過(guò)免疫熒光的方法觀察海馬齒狀回區(qū)BrdU、DCX和NeuN的陽(yáng)性表達(dá)。
結(jié)果:⑴戊四氮慢性點(diǎn)燃癲癇大鼠的成功率為90%。⑵定位航行實(shí)驗(yàn):與非致癇組的大鼠相比,其余四組癲癇組大鼠的逃避潛伏期延長(zhǎng)(P<0.01);大鼠逃避潛伏期逐漸縮短隨著訓(xùn)練次數(shù)和訓(xùn)練時(shí)間的增加。當(dāng)給予側(cè)腦室注射Orexin-A后,致癇大鼠逃避潛伏期較未給予特殊藥物處理即只給予NS側(cè)腦室注射的致癇大鼠明顯縮短(P<0.01
5、);側(cè)腦室給予SB和Orexin-A組大鼠的逃避潛伏期相對(duì)于單獨(dú)只給予Orexin-A的明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。空間搜索實(shí)驗(yàn):與非致癇組的大鼠相比,慢性點(diǎn)燃的大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)增多以及平臺(tái)所在象限的游泳時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.01);當(dāng)給予側(cè)腦室注射Orexin-A后,其穿越平臺(tái)次數(shù)以及平臺(tái)所在象限的游泳時(shí)間較未給予特殊藥物處理即只給予NS側(cè)腦室注射組明顯增加(P<0.01);與側(cè)腦室單獨(dú)給予Orexin-A組相比,側(cè)腦室注射SB后再注射O
6、rexin-A組大鼠的穿越平臺(tái)的次數(shù)減少(P<0.05),且平臺(tái)所在象限的游泳時(shí)間減少(P<0.01)。⑶BrdU免疫熒光結(jié)果顯示,PTZ+OXA組大鼠海馬齒狀回SGZ BrdU+/DCX+細(xì)胞數(shù)比PTZ+NS組明顯增多(p<0.01);與PTZ+OXA組比較,PTZ+SB+OXA組大鼠齒狀回SGZ BrdU+/DCX+細(xì)胞數(shù)減少(p<0.01)。另外,PTZ+OXA組大鼠齒狀回區(qū)BrdU+和BrdU+/NeuN+表達(dá)比PTZ+NS組增
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