茶多酚對(duì)牙周膜細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：研究茶多酚(TP)對(duì)原代牙周膜細(xì)胞(PDLC)的增殖作用；建立SD大鼠牙周炎模型，觀察TP對(duì)大鼠牙周炎模型的作用。
　　 方法：⑴原代培養(yǎng)人PDLC獲得PDLC株，波形絲蛋白(Vimentin)、角蛋白(Keratin，CK)、DAB購自武漢博士德生物有限公司，SP試劑盒購自福州邁新生物科技有限公司，TP購自杭州天誠藥業(yè)有限公司，LPS購自上海基星生物科技有限公司(產(chǎn)自Sigma公司)，ALP試劑盒購自美國Synermed

2、公司，人Ⅰ型膠原蛋白ELISA試劑盒購自上海西塘生物科技有限公司(產(chǎn)自美國SBA公司)，SD大鼠購自浙江大學(xué)動(dòng)物中心。⑵分體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)。用實(shí)驗(yàn)用PBS液配制不同濃度的TP水溶液，用蓋玻片+酶消化組織塊法培養(yǎng)原代PDLC，第三代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞鑒定，以第四代PDLC為體外藥效的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停肔PS刺激PDLC，分別通過MTT法，觀察不同濃度下的TP水溶液對(duì)PDLC的增殖和LPS的抑制作用；通過堿性磷酸酶(ALP)活性測(cè)定法觀察TP對(duì)PDLC的

3、分化作用；通過ELISA法檢測(cè)TP作用于PDLC后，Ⅰ型膠原纖維蛋白含量的變化。以結(jié)扎絲結(jié)扎牙周、注射激素并高糖飲食，建立的SD大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎癥為體內(nèi)藥效的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過組織切片HE染色觀察牙周組織形態(tài)學(xué)的變化，初步探討TP對(duì)牙周炎癥的作用。
　　 結(jié)果：TP對(duì)PDLC有增殖作用，且成濃度依賴性(p=0.00)：5ug/ml，10ug/ml，50ug/ml，100ug/ml和200ug/mlTP水溶液與對(duì)照組相比較能促進(jìn)PDL

4、C的增殖，200ug/ml作用效果最好(p=0.00)，300 ug/ml時(shí)細(xì)胞增殖率下降(p=0.00)，Tp作用于PDLC，24h即可起作用，且24h與48h無時(shí)間差異(p=0.05)。LPS對(duì)PDLC有抑制作用，有濃度依賴性(p=0.00)和時(shí)間依賴性(p=0.017)，200ug/mlTP水溶液對(duì)LPS刺激PDLC4.8h后的炎癥有顯著的抑制作用(p=0.04，p=0.019)。ALP活性測(cè)定及Ⅰ型膠原纖維蛋白含量測(cè)定結(jié)果表明：

5、TP作用于PDLC后24h，能提高PDLC的分化能力，且呈濃度依賴性(p=0.005)，200ug/ml效果最好。24h和48h比較，p=0.07，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TP隨著濃度的增加和時(shí)間的延長，Ⅰ型膠原纖維蛋白含量增加，PDLC經(jīng)LPS刺激后，TP對(duì)其有顯著的抑制作用，TP能有效抑制LPS對(duì)牙周Ⅰ型膠原纖維蛋白的破壞，TP對(duì)PDLC作用48h效果較24h好(p=0.003，p=0.001)。TP對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型的療效：2mg/ml濃度

6、的水溶液，能緩解實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型的牙周破壞，促進(jìn)牙周膜的再生，對(duì)牙周炎有一定的治療作用，可以作為牙周炎治療的輔助性藥物。
　　 結(jié)論：TP水溶液可以促進(jìn)PDLC的增殖、體外分化，促進(jìn)牙周組織中Ⅰ型膠原纖維蛋白含量增加。24h，200ug/ml濃度的TP水溶液效果最好。TP水溶液可以抑制LPS對(duì)PDLC的破壞，促進(jìn)Ⅰ型膠原纖維蛋白的增加。TP水溶液作用于經(jīng)LPS刺激的PDLC48h，其抑制效果最好。牙周結(jié)扎、牙周激素注射及高糖飲食