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文檔簡介
1、基于氧化應(yīng)激在各種疾病中的影響,近年來國內(nèi)外許多學(xué)者都致力于氧化損傷在全身疾病中作用的研究。牙周疾病是人類口腔疾病中兩大最常見的疾病之一。在我國,牙周疾病的患病率明顯高于齲病[1]。隨著患者對牙周疾病治療的需求明顯增加,對牙周疾病的病因以及損傷機(jī)制的研究報(bào)道也在增加,這對牙周疾病進(jìn)行針對性的治療有著重要的臨床指導(dǎo)意義。最近學(xué)者們研究發(fā)現(xiàn),牙周感染后的氧化應(yīng)激(oxidative stress,OS)必然發(fā)生,而氧化損傷是導(dǎo)致牙周組織損傷
2、的主要因素之一[2],但是目前針對牙周組織的氧化損傷及抗氧化作用機(jī)制卻少有研究。據(jù)分析,氧化損傷是代謝性系統(tǒng)性疾病與牙周炎之間的一個(gè)潛在的連接,兩種環(huán)境中氧化損傷產(chǎn)物的血清水平均有升高,這些產(chǎn)物都具有雙向影響性[3,4]。氧化損傷是炎癥反應(yīng)的一個(gè)組成部分,所以在一般炎癥治療時(shí)不能忽視抗氧化治療,需應(yīng)予以重視[5]。黃岑苷作為中藥黃岑的提取物,具有抗炎、抗菌、抗氧化等作用,已成熟用于機(jī)體其他組織的氧化損傷治療。因此,本研究以原代培養(yǎng)的人牙
3、周膜細(xì)胞為基礎(chǔ),用H2O2誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞氧化損傷,建立其氧化損傷模型,模擬人牙周膜細(xì)胞氧化損傷環(huán)境,探討中藥提取物黃岑苷在H2O2誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞損傷后的細(xì)胞抗氧化反應(yīng)和細(xì)胞毒性中的保護(hù)作用。
1.目的:
1.運(yùn)用H2O2建立人牙周膜細(xì)胞氧化損傷模型。
2.探索黃岑苷對H2O2誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞氧化損傷后的保護(hù)作用。
2.方法:
1.原代培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞(human periodonta
4、l ligament cells, hPDLCs)并鑒定。
2.CCK-8法檢測細(xì)胞增殖及活性,選擇適合的H2O2濃度,建立人牙周膜細(xì)胞氧化損傷模型。
3.采用Hoechst33342熒光染色法觀察損傷后細(xì)胞核形態(tài)。
4.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組人牙周膜細(xì)胞對H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性反應(yīng)變化及黃岑苷對損傷后細(xì)胞的作用。
5采用分光光度計(jì)法檢測各組細(xì)胞及其上清液的LDH、MDA含量,從而闡明黃岑苷對人牙
5、周膜細(xì)胞氧化損傷后的保護(hù)作用。
3.結(jié)果:
1.H2O2引起人牙周膜細(xì)胞增殖活性下降,在H2O2濃度為200μmol/L處理細(xì)胞2h,其吸光度值與其他濃度組有差異(P<0.05)。
2.在H2O2濃度為200μmol/L處理細(xì)胞2h,其凋亡率與其他濃度組有差異(P<0.05)。
3.濃度為200μmol/L的H2O2損傷后的人牙周膜細(xì)胞經(jīng)不同濃度的黃岑苷處理24h,1-10μg/ml的黃岑苷均能有
6、效的降低細(xì)胞的早期、晚期凋亡率,與其他濃度組有顯著差異(P<0.05)。
4.濃度為200μmol/L的H2O2損傷后的人牙周膜細(xì)胞經(jīng)不同濃度的黃岑苷處理24h,1μg/ml的黃岑苷能有效的降低細(xì)胞及其上清液中LDH活性、MDA含量和漏出率,與其他濃度組有顯著差異(P<0.05)。
4.結(jié)論:
200μmol/L的H2O2可導(dǎo)致人牙周膜細(xì)胞凋亡率增高,同時(shí)細(xì)胞的LDH、MDA漏出率上升,造成細(xì)胞氧化損傷,建
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