茶多酚對化療脫發(fā)的預(yù)防作用研究.pdf

1、化療具有許多副作用,如脫發(fā)、惡心、嘔吐和腹瀉。大多數(shù)傳統(tǒng)的細(xì)胞毒抗腫瘤藥物傷害迅速分裂的毛囊細(xì)胞而導(dǎo)致脫發(fā)。化療脫發(fā)(Chemotherapy-induced alopecia,CIA)是身體上和心理上最令人痛苦的腫瘤化療藥物副作用之一,也是臨床腫瘤學(xué)主要的未解決難題之一。 綠茶多酚(GTP)主要由表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)]、表沒食子兒茶素[(-)-epi

2、galloeatechin(EGC)]、表兒茶素沒食子酸酯[(-)-epicatechin-3-gallate(ECG)]、表兒茶素[(-)-epicatechin (EC)]、沒食子兒茶素[(+)-gallocatechin(GC)]和兒茶素(C)組成。 以前研究證明,茶多酚能促進(jìn)小鼠正常毛發(fā)的再生,EGCG在體外可通過對真皮乳頭細(xì)胞的增殖和抗凋亡作用而促進(jìn)人毛發(fā)的生長,并且可能通過選擇性地抑制5α-還原酶的活性而有助于預(yù)防或

3、治療雄激素性禿發(fā)。 在我們的前期工作中,發(fā)現(xiàn)茶多酚可能對臨床化療脫發(fā)有效,并在小鼠化療脫發(fā)模型中證明口服茶多酚能顯著減輕環(huán)磷酰胺引起的脫發(fā)并促進(jìn)毛發(fā)再生。但至今未見其它有關(guān)茶多酚及其成分對化療脫發(fā)作用的報道。 本課題進(jìn)一步研究茶多酚在小鼠和大鼠化療脫發(fā)模型中對環(huán)磷酰胺引起脫發(fā)的影響及其作用機(jī)理；研究茶多酚在體外對毛囊生長和阿霉素誘導(dǎo)的毛囊及毛囊細(xì)胞毒性的影響；研究茶多酚對化療藥物抗腫瘤療效及毒性的影響。 用C57

4、BL/6小鼠化療脫發(fā)模型研究茶多酚對環(huán)磷酰胺引起脫發(fā)的影響。脫毛后第9天,小鼠一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺100～120 mg/kg誘導(dǎo)脫發(fā)。脫毛后第13和第20天,與環(huán)磷酰胺組相比,環(huán)磷酰胺+茶多酚組小鼠背部皮膚脫發(fā)百分比明顯減小。結(jié)果表明,茶多酚能顯著減少環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的脫發(fā),并能促進(jìn)毛發(fā)的再生。 用新生大鼠化療脫發(fā)模型研究茶多酚對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)脫發(fā)的影響。出生后第13天大鼠一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺35 mg/kg誘導(dǎo)脫發(fā)。注射環(huán)磷酰胺

5、后第5天,環(huán)磷酰胺組大鼠出現(xiàn)輕微或中度嚴(yán)重脫發(fā),第8天大鼠全身脫發(fā)。注射環(huán)磷酰胺后第5天,茶多酚(100 mg/kg,i.p.)+環(huán)磷酰胺組大鼠出現(xiàn)可察覺的脫發(fā),第8天大多數(shù)出現(xiàn)輕微脫發(fā)?？梢姴瓒喾?100 mg/kg,i.p.)對環(huán)磷酰胺引起的新生大鼠脫發(fā)具有明顯的預(yù)防作用。注射環(huán)磷酰胺后第8天,與環(huán)磷酰胺組相比,茶多酚+環(huán)磷酰胺組大鼠背部毛囊的凋亡細(xì)胞明顯減少,并且多數(shù)毛囊仍處于生長期。這表明茶多酚可明顯減輕環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的毛囊細(xì)胞凋

6、亡,阻止毛囊退行并延長毛發(fā)生長期持續(xù)時間。 以添加10μg/ml胰島素、100 U/ml青霉素、100 μg/ml鏈霉素的William's E培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠和新生大鼠觸須毛囊。將小鼠觸須毛囊培養(yǎng)5天,0.1～1000μg/ml茶多酚各組毛囊毛發(fā)的平均生長長度呈劑量依賴性減少,其中10～1000μg/ml茶多酚處理的毛囊,其平均毛發(fā)生長長度明顯小于對照組。將大鼠觸須毛囊培養(yǎng)5天,0.1～1000μg/ml茶多酚各組毛囊毛發(fā)的平均

7、生長長度呈劑量依賴性減小,其中10～1000μg/ml茶多酚處理的毛囊,其平均毛發(fā)生長長度明顯小于對照組；10-9～10-3μg/ml茶多酚處理的毛囊,其平均毛發(fā)生長長度大于對照組,其中10-5～10-3μg/ml茶多酚處理的毛囊,其平均毛發(fā)生長長度明顯大于對照組。結(jié)果表明茶多酚對毛囊毛發(fā)的生長具有促進(jìn)或抑制作用,即較低濃度的茶多酚能促進(jìn)毛囊的生長,較高濃度茶多酚抑制毛囊的生長。用毛囊和毛囊細(xì)胞培養(yǎng)研究茶多酚在體外對阿霉素誘導(dǎo)的毛囊及毛

8、囊細(xì)胞毒性的影響。0.1、1和10μg/ml茶多酚處理的毛囊,其平均毛發(fā)生長長度明顯大于阿霉素組,而高濃度(≥100μg/ml)茶多酚處理的毛囊,其平均毛發(fā)生長長度與阿霉素組相比差異不明顯?？梢?在體外0.1和10μg/ml茶多酚顯著抑制阿霉素對毛囊的毒性,而高濃度茶多酚(≥100μg/ml)對毛囊不具有保護(hù)作用。與阿霉素處理的毛囊真皮鞘細(xì)胞相比,1和10μg/ml茶多酚處理的真皮鞘細(xì)胞的細(xì)胞活力顯著增加。這表明1和10μg/ml的茶多

9、酚顯著抑制阿霉素對毛囊細(xì)胞的毒性。用阿霉素或阿霉素+茶多酚培養(yǎng)的大鼠觸須皮膚的切片進(jìn)行H&E和TUNEL染色檢測,與阿霉素組毛囊相比,1μg/ml茶多酚+10μg/ml阿霉素組毛囊球部凋亡細(xì)胞明顯減少。這表明茶多酚可明顯減輕阿霉素誘導(dǎo)的毛囊細(xì)胞凋亡。在毛囊細(xì)胞集落形成檢測中,29.30％ADM+TP處理的毛囊及9.30％ADM處理的毛囊形成毛囊細(xì)胞集落,并且ADM+TP處理毛囊形成的毛囊細(xì)胞集落的細(xì)胞數(shù)明顯多于ADM處理的毛囊。這表明茶

10、多酚可明顯抑制阿霉素對毛囊的毒性。 用小鼠S180模型研究茶多酚對環(huán)磷酰胺療效及荷瘤小鼠外周血象的影響。茶多酚150、300、600 mg/kg單用,3個劑量組的平均瘤重均低于對照組,其中低劑量組與對照組相比有顯著性差異。環(huán)磷酰胺與茶多酚各劑量組合用與環(huán)磷酰胺單用相比,瘤重雖有所降低,但差異不明顯。結(jié)果表明較低濃度的茶多酚具有顯著的抗腫瘤作用,并且茶多酚不影響環(huán)磷酰胺的抗腫瘤療效。150、300、600 mg/kg茶多酚組的白細(xì)

11、胞數(shù)均明顯高于對照組。環(huán)磷酰胺+茶多酚各劑量組的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板數(shù)及血紅蛋白含量與環(huán)磷酰胺組相比,差異均不明顯.結(jié)果表明各劑量茶多酚單用對荷瘤小鼠具有明顯的升高白細(xì)胞作用,但與環(huán)磷酰胺合用后對環(huán)磷酰胺引起的荷瘤小鼠外周血象降低沒有明顯的改善作用,這表明150～600 mg/kg茶多酚對荷瘤小鼠應(yīng)用環(huán)磷酰胺后的骨髓抑制毒性沒有明顯的改善作用。 用人HepG2腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)研究茶多酚在體外對阿霉素抗腫瘤作用的影響。在體外,阿霉素

12、和茶多酚對HepG2細(xì)胞均具有細(xì)胞毒作用,而且茶多酚與阿霉素合用不影響阿霉素的細(xì)胞毒性。用白細(xì)胞減少癥模型研究茶多酚在小鼠體內(nèi)對環(huán)磷酰胺導(dǎo)致毒性的影響。與給藥前相比,第7天環(huán)磷酰胺組和環(huán)磷酰胺+茶多酚組的白細(xì)胞總數(shù)均顯著下降,但后來自細(xì)胞總數(shù)逐漸回升,第15天環(huán)磷酰胺+茶多酚組的白細(xì)胞總數(shù)明顯高于環(huán)磷酰胺組,表明茶多酚具有明顯的升白作用。 綜上所述,茶多酚在小鼠和大鼠化療脫發(fā)模型中對環(huán)磷酰胺引起的脫發(fā)具有顯著的預(yù)防作用；在大鼠化

13、療脫發(fā)模型中,茶多酚可明顯減輕環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的毛囊細(xì)胞凋亡,阻止毛囊退行并延長毛發(fā)生長期持續(xù)時間；茶多酚在體外對毛囊毛發(fā)的生長具有促進(jìn)或抑制作用；茶多酚在體外能顯著減輕阿霉素誘導(dǎo)的毛囊細(xì)胞凋亡,并顯著減輕阿霉素對毛囊和毛囊細(xì)胞的毒性；茶多酚在小鼠體內(nèi)具有顯著的抗腫瘤作用,且與環(huán)磷酰胺合用不影響環(huán)磷酰胺的抗腫瘤療效；茶多酚對環(huán)磷酰胺引起的正常小鼠的白細(xì)胞降低具有顯著的抑制作用,且對S180荷瘤小鼠的白細(xì)胞有顯著的提升作用,但對環(huán)磷酰胺引起的