RNA激活上調(diào)膽囊癌細(xì)胞p21WAF1-CIP1基因表達(dá)的體外實驗研究.pdf

1、目的：在膽囊癌細(xì)胞系GBC-SD中利用RNA激活技術(shù)上調(diào)人膽囊癌細(xì)胞（GBC-SD）中p21基因的表達(dá)，觀察其對GBS-SD細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響。探討將p21基因作為膽囊癌靶向治療分子的可能性及其機(jī)制，為膽囊癌的基因治療提供一定的理論基礎(chǔ)和試驗依據(jù)。
　　方法：將與p21基因啟動子DNA序列互補(bǔ)的雙鏈RNA分子dsp21-322及陰性對照片段dsControl分別轉(zhuǎn)染入人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD中，空白對照組只加入脂質(zhì)體

2、，分別采用RT-PCR法和Western blot分別檢測三組p21WAF1/CIP1基因mRNA及蛋白的表達(dá)情況；采用MTT法檢測細(xì)胞增殖活性；用Transwell小室法檢測RNAa后細(xì)胞侵襲、遷移能力的變化。
　　結(jié)果：dsRNA轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞72h后，RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示：與空白對照組和陰性對照組相比，實驗組dsp21-322能有效上調(diào)GBC-SD細(xì)胞p21基因的表達(dá)，可以使其表達(dá)量增加到2倍

3、左右。MTT法顯示實驗組GBC-SD的生長抑制較陰性對照組明顯，在第2~5天四個時間點上實驗組的存活率分別為74.1％、51.3%、44.8%、39.6%，與陰性對照組相比都有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。Transwell侵襲及遷移實驗顯示：實驗組 dsp21-322作用于膽囊癌細(xì)胞72h后，穿透至膜下表面的細(xì)胞數(shù)均低于空白組和對照組的細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1、dsp21-322轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞7