夜香樹提取物Nocturnoside B抗人白血病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討夜香樹提取物Nocturnoside B在體內(nèi)體外對人白血病K562細(xì)胞的作用，并探討其可能的機(jī)制。
　　方法:（1）用MTT檢測不同濃度的Nocturnoside B對人白血病K562細(xì)胞的增殖抑制作用，并觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。（2）應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測細(xì)胞凋亡率，用Annexin V/PI雙標(biāo)記法、TUNEL法檢測細(xì)胞的早期凋亡變化。（3）通過檢測細(xì)胞中 Caspase-3酶活性、蛋白質(zhì)印跡法（Western

2、Blotting）檢測凋亡蛋白Caspase-3、細(xì)胞質(zhì)和線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C表達(dá)，以及DNA瓊脂糖凝膠電泳分析法檢測DNA圖譜的變化來闡述 Nocturnoside B體外誘導(dǎo) K562細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。（4）對Nocturnoside B進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，確定其LD50，為進(jìn)行下一步研究奠定基礎(chǔ)。（5）通過尾靜脈注射 K562細(xì)胞的方法建立 SCID小鼠人白血病模型，采用外周血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)法，化學(xué)免疫學(xué)病理檢查以及骨髓涂片細(xì)胞形態(tài)檢

3、測等方法確定 Nocturnoside B在體內(nèi)對人白血病 K562細(xì)胞動(dòng)物模型的作用。（6）通過 FCM檢測CD13表達(dá)率以及Western blotting檢測脾臟組織中PI3K、AKT及PTEN蛋白的表達(dá)情況來闡述Nocturnoside B對人白血病K562細(xì)胞動(dòng)物模型作用的可能機(jī)制。
　　結(jié)果:（1）Nocturnoside B對K562細(xì)胞生長具有顯著的抑制作用，并呈劑量-時(shí)間依賴性。（2）Nocturnoside B

4、可誘導(dǎo) K562細(xì)胞凋亡，經(jīng)Nocturnoside B處理后的K562細(xì)胞Annexin V+/P-細(xì)胞顯著增加，在熒光下可觀察到TUNEL細(xì)胞涂片有明顯的熒光效應(yīng)。（3）經(jīng)Nocturnoside B處理后的 K562細(xì)胞 DNA電泳呈梯形條帶，并且可以活化細(xì)胞中Caspase-3酶活性以及促進(jìn)線粒體細(xì)胞色C的釋放。（4）Nocturnoside B的LD50=31.02 mg/kg，表明其有一定的毒性。（5）成功建立SCID人白血

5、病動(dòng)物模型后，經(jīng)Nocturnoside B治療后，與對照組比較，Nocturnoside B組白細(xì)胞總數(shù)和CD13陽性表達(dá)率明顯下降，高劑量組的白細(xì)胞總數(shù)和CD13陽性表達(dá)率明顯下降（P＜0.05）；Western Blotting檢測結(jié)果亦顯示， Nocturnoside B治療組和CY組的PI3K蛋白的表達(dá)水平下調(diào)，而AKT、PTEN蛋白的表達(dá)水平則明顯高于陰性對照組；與陰性對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　

6、　結(jié)論:（1）Nocturnoside B在體外能有效抑制K562細(xì)胞的增殖，并且可以活化細(xì)胞中Caspase-3酶活性以及促進(jìn)線粒體細(xì)胞色素C的釋放，損傷其 DNA從而誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡。（2）Nocturnoside B可以抑制人移植性白血病動(dòng)物模型的白血病細(xì)胞增殖，下調(diào)其 CD13陽性表達(dá)率。（3） Nocturnoside B能誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡可能與Nocturnoside B損傷線粒體，促進(jìn)Caspase-3酶活化從而增