石參提取物抗糖尿病作用的研究.pdf

1、島素的分泌,內(nèi)源性胰島素水平升高。隨著病程的延續(xù),胰島素抵抗加重,胰島p細(xì)胞功能受損,胰島素分泌不能代償胰島素的抵抗,胰島素水平降低,同時(shí),胰島素刺激的葡萄糖利用減少,不能有效抑制肝糖原分解輸出葡萄糖,從而導(dǎo)致血糖升高,最終出現(xiàn)糖尿病。
　　 研究認(rèn)為,氧化應(yīng)激時(shí)體內(nèi)活性氧(reactive oxygen soecies,ROS)生成增多,損傷胰島β細(xì)胞,引起細(xì)胞壞死或凋亡,導(dǎo)致胰島素分泌缺乏,加重胰島素抵抗；同時(shí),脂質(zhì)代謝異常

2、也會(huì)參與ROS對(duì)胰島細(xì)胞的損傷,造成胰島β細(xì)胞功能障礙。因此,通過改變機(jī)體的ROS水平,進(jìn)而改善胰島素抵抗、保護(hù)胰島β細(xì)胞功能對(duì)于干預(yù)IGT和治療Ⅱ型糖尿病至關(guān)重要。
　　 目前治療Ⅱ型糖尿病的口服藥物主要有促胰島素分泌藥,胰島素增敏藥、α糖苷酶抑制劑等,雖然西藥治療Ⅱ型糖尿病具有降糖快速、療效好的特點(diǎn),但對(duì)胰島素抵抗、糖耐量受損以及以脂代謝紊亂為主的機(jī)體整體功能調(diào)節(jié),不能令人滿意,且長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生有明顯的不良反應(yīng),如磺酰脲類易

3、引起低血糖,胰島素易導(dǎo)致水腫等。因此,尋找一種能有效治療糖尿病,調(diào)節(jié)機(jī)體整體功能,毒副作用低的藥物,對(duì)干預(yù)IGT和治療Ⅱ型糖尿病具有重要意義。
　　 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,石參具有很好的抗炎作用,能有效的抑制應(yīng)激性潰瘍、治療胃痛等疾病。體外研究表明,石參甲醇提取液具有清除NO、抵抗氧自由基的作用,并且在中國(guó)廣東、廣西省,石參作為民間藥物用于治療輕型糖尿病,但尚未有實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)石參治療糖尿病的作用。
　　 第一部分石參水煎液對(duì)STZ

4、+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病模型小鼠的影響
　　 目的
　　 通過觀察石參水煎液對(duì)STZ+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病模型小鼠的血糖、血脂以及胰島、肝臟和附睪組織形態(tài)的影響,探討石參水煎液的抗糖尿病作用。
　　 方法
　　 1.STZ+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病小鼠模型的建立
　　 雄性C57BL/6J小鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按完全隨機(jī)方法分為正常組和造模組。正常組小鼠以普通飼料喂飼；造模組小鼠以高脂飼料

5、喂養(yǎng)2周后,腹腔注射STZ(STZ現(xiàn)配現(xiàn)用,生理鹽水配成10mg/ml),按100mg/kg的劑量給藥,即0.1ml/10g鼠重,0.5h內(nèi)注射完,每周一次,連續(xù)兩周。兩周后,篩選餐后血糖>200mg/dl為造模成功小鼠。
　　 2.石參水煎液的制備
　　 取干燥石參藥材,加適量水煎2小時(shí),取上清,過濾后負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),濃縮至一定濃度石參水煎液,4℃低溫保存?zhèn)溆谩?br>　　 3.石參水煎液對(duì)STZ+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖

6、尿病小鼠的影響
　　 篩選餐后血糖>200mg/dl的小鼠,按完全隨機(jī)方法分為:正常對(duì)照組,模型對(duì)照組,石參水煎液低(3g/kg)、高(9g/kg)劑量組,二甲雙胍陽性藥對(duì)照組(500mg/kg),共5組。各組小鼠連續(xù)給藥21天后,檢測(cè)餐后血糖的變化。治療14天后,禁食過夜,灌胃葡萄糖,尾靜脈采血后檢測(cè)葡萄糖耐量。給藥處理21天后,在小鼠眼眶后靜脈叢采血,獲得血清用于測(cè)定血清胰島素、甘油三酯和游離脂肪酸。處死動(dòng)物,取動(dòng)物心臟、肝

7、臟、雙側(cè)附睪,稱重。并取胰腺,置于10％福爾馬林中保存,作病理切片檢查。
　　 結(jié)果
　　 1.采用STZ+高脂飲食可制備出理想的Ⅱ型糖尿病小鼠模型。
　　 2.石參水煎液可顯著改善模型小鼠的葡萄糖耐量(P<0.05),調(diào)節(jié)胰島素的分泌(P<0.05),顯著降低血清甘油三酯(P<0.01)水平,抑制游離脂肪酸的產(chǎn)生(P<0.01),但對(duì)餐后血糖沒有明顯影響。
　　 3.病理切片顯示,石參水煎液能減輕鏈脲佐

8、菌素對(duì)胰島β細(xì)胞的破壞,對(duì)受損傷的胰島β細(xì)胞具有一定的修復(fù)功能。并且,石參水煎液還可以不同程度地減輕模型小鼠肝臟和附睪組織的損害。
　　 結(jié)論
　　 1.采用STZ+高脂飲食的方法成功構(gòu)建了C57BL/6J小鼠Ⅱ型糖尿病模型,可作為石參抗糖尿病作用的研究。
　　 2.石參水煎液能顯著改善糖尿病模型小鼠的葡萄糖耐量,調(diào)節(jié)胰島素的分泌,降低甘油三酯和游離脂肪酸。
　　 3.石參水煎液對(duì)損傷的胰島細(xì)胞有一定的修

9、復(fù)作用,且能改善糖尿病小鼠肝臟及附睪組織的損傷。第二部分石參不同提取物對(duì)STZ+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病模型小鼠的影響
　　 目的
　　 通過觀察石參不同提取物對(duì)STZ+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病模型小鼠的血糖、血脂的影響,探討石參不同提取物的抗糖尿病作用。
　　 方法
　　 1.STZ+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病小鼠模型的建立
　　 適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,雄性C57BL/6J小鼠再以高脂飼料喂飼2周,腹

10、腔注射STZ(STZ現(xiàn)配現(xiàn)用,生理鹽水配成10mg/ml),按100mg/kg的劑量給藥,即0.1ml/10g鼠重,0.5h內(nèi)注射完,每周一次,連續(xù)兩周。兩周后,篩選餐后血糖>200mg/dl為造模成功小鼠。
　　 2.石參所含組分分析
　　 取少量中藥粗粉,分別用蒸餾水、乙醇和石油醚進(jìn)行初步處理后,得到水浸液、乙醇提取液和石油醚提取液,加入不同的試劑對(duì)其進(jìn)行成分預(yù)試。
　　 取干燥藥材,用乙醇回流提取后濾過,藥

11、渣保留,合并濾液減壓回收乙醇至100ml,平分成兩份,一份蒸至稠膏狀后70℃真空干燥得到提取物A。另一份濃縮到無醇昧用濃氨水調(diào)pH值得到提取液。用等體積氯仿萃取,合并氯仿層,蒸干得到提取物B,水層蒸至稠膏狀70℃真空干燥得到提取物C。藥渣揮干乙醇后,加水煎煮后過濾,合并濾液濃縮至稠膏狀,70℃真空干燥,得到提取物D。A、B、C、D加甲醇溶解后,制成供試品用于薄層色譜鑒別。
　　 3.石參不同提取物的制備
　　 取干燥藥材

12、,加乙酸乙酯,回流提取后濾過,藥渣保留。濾液減壓回收乙酸乙酯成稠膏狀,70℃真空干燥,得到乙酸乙酯提取物。加蒸餾水制成乙酸乙酯提取物混懸液。
　　 藥渣揮去乙酸乙酯后,加90％乙醇,回流提取后濾過,藥渣保留。濾液減壓回收乙醇成稠膏狀,70℃真空干燥,得到乙醇提取物。加蒸餾水溶解制成乙醇提取液。
　　 藥渣揮去乙醇后,加水回流提取,濾過,藥渣棄去。濾液濃縮至稠膏狀,70℃真空干燥,得到水提取物。加蒸餾水溶解制成水提取液。<

13、br>　　 4.石參不同提取物對(duì)STZ+高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病模型小鼠的影響
　　 篩選餐后血糖>200mg/dl的小鼠,按完全隨機(jī)方法分為:模型對(duì)照組,石參乙酸乙酯提取物組(18g/kg),乙醇提取物組(18g/kg),水提取物組(18g/kg)和消渴丸陽性藥對(duì)照組(500mg/kg),共5組。各組小鼠連續(xù)給藥21天后,檢測(cè)餐后血糖的變化。治療14天后,禁食過夜,灌胃葡萄糖,尾靜脈采血后檢測(cè)葡萄糖耐量。給藥處理21天后,在

14、小鼠眼眶后靜脈叢采血,獲得血清用來測(cè)定血清胰島素、甘油三酯和游離脂肪酸。
　　 結(jié)果
　　 1.石參組分分析結(jié)果證實(shí)石參含有多糖、黃酮類、皂苷及氨基酸等成分。
　　 2.石參不同提取物可降低模型小鼠的空腹血糖,改善Ⅱ型糖尿病小鼠的葡萄糖耐量,其中乙醇提取物在60min和120min時(shí)的血糖水平分別為29.66％和59.75％,血糖水平下降幅度較大。
　　 3.石參乙醇提取物可降低甘油三酯水平,抑制游離脂肪

15、酸的分泌,改善脂質(zhì)代謝,但對(duì)餐后血糖沒有明顯影響。
　　 結(jié)論
　　 1.石參含有多糖、黃酮類、皂營(yíng)及氨基酸等成分。
　　 2.石參不同提取物顯示出一定的抗小鼠Ⅱ型糖尿病的作用,可降低Ⅱ型糖尿病小鼠的空腹血糖,對(duì)受損的糖耐量具有改善作用,并在一定程度上能降低血清甘油三酯和游離脂肪酸的水平,其中以乙醇提取物的效果較好。
　　 第三部分石參乙醇提取物對(duì)高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠血脂代謝的影響
　　 目的

16、r>　　 通過觀察石參乙醇提取物對(duì)高脂飲食致肥胖性SD大鼠血脂代謝的影響,探討石參對(duì)SD大鼠血脂代謝的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法
　　 1.肥胖性SD大鼠模型的建立
　　 SD大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按完全隨機(jī)方法分組,正常組5只,以普通飼料喂養(yǎng)。造模組SD大鼠高脂飼料喂飼4周后,篩選體重>200g的SD大鼠為造模成功大鼠。
　　 2.石參乙醇提取物的制備
　　 取干燥藥材,加乙酸乙酯,回流提取后濾

17、過,藥渣保留。藥渣揮去乙酸乙酯后,加90％乙醇,回流提取后濾過。濾液減壓回收乙醇成稠膏狀,70℃真空干燥,得到乙醇提取物。加蒸餾水溶解制成乙醇提取液。
　　 3.石參乙醇提取物對(duì)SD大鼠血脂代謝的影響
　　 篩選體重>200g的SD大鼠,按完全隨機(jī)方法分為:正常對(duì)照組,模型對(duì)照組,石參乙醇提取物組(18g/kg)和洛伐他汀陽性藥對(duì)照組(10mg/kg),共4組。給藥處理前后,均于SD大鼠眼眶后靜脈叢采血,獲得血清用來測(cè)定

18、血清總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。
　　 結(jié)果
　　 1.治療前后比較,給予石參乙醇提取物處理的SD大鼠血清總膽固醇值下降了42.7％(P<0.05),血清高密度脂蛋白膽固醇值(HDL-C)升高8.41％(P<0.05),組間有顯著差異。
　　 2.給予石參乙醇提取物處理后,SD大鼠的血清總膽固醇值有明顯降低,顯著低于正常大鼠TC水平(P<0.01)。