α-乳香酸抗急性髓細(xì)胞白血病血管新生的實驗研究.pdf

1、民間應(yīng)用乳香樹脂提取物治療多種不同慢性炎癥性疾病已經(jīng)很長時間了。來自動物模型及人體的實驗數(shù)據(jù)已經(jīng)確認(rèn)乳香樹脂提取物不僅具有治療炎癥性疾病的能力，同時具有抗腫瘤效能。對樹脂提取物成分的分析揭示五環(huán)三萜類化合物乳香酸具有多種生物學(xué)活性及藥理學(xué)作用。在闡明乳香酸類化合物(boswellic acids，BAs)生物效應(yīng)分子機制的研究中發(fā)現(xiàn)5-LO、人白細(xì)胞彈性蛋白酶、端粒酶Ⅰ和端粒酶Ⅱ以及激肽酶是BAs作用的靶標(biāo)，而且根據(jù)細(xì)胞類型及結(jié)構(gòu)不同，

2、BAs在不同細(xì)胞分別影響炎癥反應(yīng)及腫瘤生長信號傳導(dǎo)途徑，包括Ca2+，MAPK信號肽?；谠谥嗅t(yī)及印度民間醫(yī)藥中觀察到的一些效果，科學(xué)家們開展了許多動物試驗及在受試人進(jìn)行了臨床試驗。在動物模型上，BAs單體或包含了很多種成分的B.spec提取物，都顯示具有潛在的治療炎癥疾病（風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、自身免疫腦脊髓炎、回腸炎、結(jié)腸炎、肝炎等）、疼痛、高脂血癥、高膽固醇血癥、過敏反應(yīng)等藥理學(xué)效果。實際上，在人體的研究亦顯露出其能干預(yù)風(fēng)濕性關(guān)

3、節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、腦及其他腫瘤、潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn's病及支氣管哮喘的潛能。國內(nèi)外學(xué)者研究乳香酸類化合物抗白血病作用，主要集中在促進(jìn)白血病細(xì)胞分化及誘導(dǎo)凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，而有關(guān)調(diào)節(jié)微血管新生方面的研究尚未見報道。本次研究對于進(jìn)一步深刻了解乳香提取物及其單體乳香酸類化合物的藥理作用機制具有比較深遠(yuǎn)的意義，對于中藥的開發(fā)及臨床廣泛推廣應(yīng)用亦會產(chǎn)生積極的影響。
　　目的：①闡明臨床急性髓細(xì)胞白血病患者體內(nèi)血管新生與分型、預(yù)后

4、、浸潤的關(guān)系以及與血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)的相關(guān)性。②研究乳香單體α-乳香酸對白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞增殖的影響，對HL-60細(xì)胞VEGF及其受體（FLt-1和KDR/FLK-1）表達(dá)的影響。③通過體內(nèi)試驗，研究α-乳香酸對體內(nèi)白血病細(xì)胞分泌VEGF的影響，以及對骨髓微血管新生的作用。
　　方法：①收集骨髓液，分離單個核細(xì)胞（monocyte，MNC），

5、免疫組化檢測急性白血病患者骨髓單個核細(xì)胞內(nèi)VEGF蛋白的表達(dá);②取骨髓活檢組織，石蠟包埋、切片后免疫組化染色檢測骨髓微血管密度;③MTT試驗檢測α-乳香酸對白血病細(xì)胞體外增殖的影響;④Real-time PCR檢測α-乳香酸對VEGF及受體（FLT-1及KDR/FLK-1）mRNA表達(dá)的影響;⑤Western Blot法檢測α-乳香酸對細(xì)胞VEGF及其受體蛋白表達(dá)的影響;⑥3Gy60Co射線照射BALB/C裸鼠，通過注射HL-60細(xì)胞構(gòu)

6、建急性白血病動物模型;⑦組織病理學(xué)檢查及染色體G顯帶法鑒定白血病動物模型;⑧ELISA法檢測不同劑量α-乳香酸處理組模型裸鼠血漿VEGF濃度的變化;⑨免疫組化染色檢測各組裸鼠骨髓微血管密度(microvessel density，MVD)。
　　結(jié)果：①初治急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)患者和對照組骨髓組織中的微血管密度分別為:30.03±4.37/hotspot和9.85±3.44/hot

7、 spot，AML患者顯著高于正常人（對照組）(P＜0.05)。經(jīng)治療達(dá)到完全緩解病例MVD降至12.27±2.40/hotspot，與初治AML患者M(jìn)VD水平有顯著性差異，而與正常人對照組無明顯差異。②急性白血病按照FAB方法分組，不同組間的平均MVD進(jìn)行比較，組間分析采用方差分析F檢驗比較其差異，不同組間平均MVD無明顯差異(P＞0.05);③無髓外浸潤組MVD為19.93±8.02/hotspot，髓外浸潤組MVD為30.00±5

8、.40/hot spot，兩組MVD比較有顯著差異(P＜0.05);④VEGF在急性白血病外周血MNC表達(dá)陽性率70％，完全緩解病例其陽性率下降至6.7％;⑤α-乳香酸能抑制HL-60細(xì)胞增殖，2.5mg/L～30.0mg/L濃度范圍內(nèi)對HL-60細(xì)胞抑制率為(5.98±2.06)％～(81.99±0.76)％;⑥15.0mg/L以上濃度α-乳香酸降低HL-60細(xì)胞VEGF及VEGF受體mRNA的表達(dá);⑦15.0mg/L以上濃度α-乳香

9、酸能減少HL-60細(xì)胞后VEGF及其受體（flt-1和FLK-1/KDR）蛋白的表達(dá);⑧成功建立急性白血病動物模型;⑨100mg.kg-1.d-1α-乳香酸作用于動物，能明顯降低血清VEGF濃度及微血管密度。
　　結(jié)論：①急性髓細(xì)胞白血病中存在血管新生，骨髓MVD與白血病的分型無關(guān)，但與浸潤有密切關(guān)系。白血病患者體內(nèi)MVD的高低與腫瘤細(xì)胞VEGF的表達(dá)亦有明顯關(guān)系。②急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞表達(dá)VEGF及受體，15.0