羊膜軟組織填充材料對(duì)神經(jīng)卡壓松解術(shù)后作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過建立SD大鼠坐骨神經(jīng)慢性卡壓模型，研究羊膜軟組織填充材料對(duì)神經(jīng)卡壓松解術(shù)后的作用及影響。通過觀察相應(yīng)的指標(biāo)，判斷該材料能否有效預(yù)防卡壓段神經(jīng)與周圍組織粘連及促進(jìn)神經(jīng)再生。
　　 方法:1實(shí)驗(yàn)分組:取成年雌性SD大鼠64只，體重250-300克，隨機(jī)分為2組，每組32只。A組為對(duì)照組，單純解除卡壓;B組為實(shí)驗(yàn)組，解除卡壓后應(yīng)用羊膜軟組織填充材料包裹卡壓部位。2動(dòng)物模型:采用Mackinnon所設(shè)計(jì)的大白鼠坐骨神經(jīng)慢性卡壓

2、模型，卡壓2周后采用兩種不同的處理方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。3手術(shù)方法:將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物稱重后，腹腔內(nèi)麻醉，術(shù)區(qū)備皮，俯臥位固定，消毒，鋪單，于單側(cè)（右側(cè)）股后外側(cè)做平行于股骨干的切口，長(zhǎng)度約2.5cm，暴露坐骨神經(jīng)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量其直徑（平均為1.25mm）。選用內(nèi)徑為1.2mm的硅膠管，取0.5cm長(zhǎng)，縱行剖開后套在離梨狀肌下緣約1.0cm處的坐骨神經(jīng)上，用7-0無創(chuàng)傷縫線縫合硅膠管2針，注意勿將硅膠管與神經(jīng)縫合到一處，生理鹽水沖洗后滴入慶大霉素

3、注射液0.4ml，預(yù)防感染?？p合肌層及皮膚，切口碘伏涂搽后，不覆蓋任何輔料，置于飼養(yǎng)籠中自然蘇醒。術(shù)后不制動(dòng)，任其自由活動(dòng)。常規(guī)飼養(yǎng)兩周后，行肌電圖檢查，證實(shí)神經(jīng)傳導(dǎo)速度下降，A、B兩組按上述術(shù)式行2次手術(shù)。4檢測(cè)方法及指標(biāo):(1)大體觀察:觀察大鼠切口愈合情況，排異反應(yīng)（術(shù)后創(chuàng)面腫脹、炎癥等局部癥狀），有無足底潰瘍形成及自噬現(xiàn)象，行動(dòng)時(shí)是否有跛行現(xiàn)象以及術(shù)后恢復(fù)情況;觀察大鼠的毛色改變及小腿肌肉萎縮情況，羊膜軟組織填充材料吸收情況;卡

4、壓段神經(jīng)直徑大小、外膜厚度的變化;神經(jīng)與局部組織粘連情況，分離神經(jīng)時(shí)滲血及神經(jīng)活動(dòng)度等情況。(2)神經(jīng)電生理測(cè)定:術(shù)后2、4、6、8周兩組各隨機(jī)抓取8只大鼠行雙側(cè)坐骨神經(jīng)肌電圖檢查，在相同的刺激頻率(1HZ)和持續(xù)時(shí)間(0.02ms)下，測(cè)得坐骨神經(jīng)的神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)、復(fù)合肌肉動(dòng)作電位(CMAP)波幅以及末梢潛伏期，在健側(cè)坐骨神經(jīng)相同位置亦測(cè)定相同指標(biāo)。計(jì)算術(shù)側(cè)坐骨神經(jīng)CMAP波幅及末梢潛伏期占正常側(cè)的百分比，即術(shù)側(cè)坐骨神經(jīng)CM

5、AP波幅恢復(fù)比和末梢潛伏期延遲比。(3)組織學(xué)觀察:包括光鏡和電鏡觀察。術(shù)后4周、8周（取4只）標(biāo)本用10％福爾馬林固定24小時(shí)后，脫水，石蠟包埋，切片，干燥后行HE染色，然后在光鏡下觀察變性的神經(jīng)纖維數(shù)量、髓鞘的厚度以及束間結(jié)締組織與血管的增生狀況等;術(shù)后8周（剩余4只）標(biāo)本在電鏡下觀察神經(jīng)髓鞘的厚度及其板層的結(jié)構(gòu)、神經(jīng)軸索直徑、雪旺氏細(xì)胞(Schwanncell，SC)、微絲、微管、線粒體等超微結(jié)構(gòu)變化。(4)三頭肌濕重恢復(fù)率:神經(jīng)

6、電生理檢查結(jié)束后，從小腿三頭肌肌肉起止點(diǎn)處取下雙側(cè)三頭肌，剝離掉肌肉表面的脂肪和筋膜，用分析天平（萬分之一）稱重，記錄結(jié)果，并計(jì)算出三頭肌濕重恢復(fù)率，即術(shù)側(cè)肌肉濕重相對(duì)于健側(cè)肌肉濕重的百分比。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((X)±S)表示，兩組均數(shù)間的比較采用兩樣本t檢驗(yàn);推斷等級(jí)資料的兩個(gè)獨(dú)立樣本所來自的兩個(gè)總體分布位置是否有差別，采用兩個(gè)獨(dú)立樣本比較的Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。檢驗(yàn)

7、水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果:1大體觀察:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物切口全部Ⅰ期愈合，無一例感染發(fā)生，無紅腫等炎癥表現(xiàn)，無自噬及足趾脫落現(xiàn)象發(fā)生。神經(jīng)卡壓2周后右下肢毛色發(fā)黃，光澤度降低，足趾主動(dòng)伸展功能受限，并出現(xiàn)跛行，小腿后群肌肉萎縮明顯，但無足底潰瘍發(fā)生。去除卡壓物后，可見卡壓段神經(jīng)顏色較蒼白，質(zhì)地較硬，直徑明顯變細(xì)，外膜增厚，卡壓處遠(yuǎn)、近端神經(jīng)增粗明顯，呈神經(jīng)瘤樣改變。松解術(shù)后，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，兩組神經(jīng)增粗段逐漸變細(xì)，卡壓段神經(jīng)逐漸增粗

8、，神經(jīng)外膜亦逐漸變薄，直至接近正常。取材時(shí)羊膜軟組織填充材料吸收不明顯，至8周時(shí)仍有存留。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物坐骨神經(jīng)在各時(shí)間段與局部組織粘連較輕，容易鈍性分離，分離神經(jīng)時(shí)滲血較少，神經(jīng)活動(dòng)度也較好(P＜0.05，秩和檢驗(yàn))。2神經(jīng)電生理測(cè)定:模型卡壓2周后，術(shù)側(cè)坐骨神經(jīng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度平均為11.65±1.00m/s。兩組在松解術(shù)后神經(jīng)傳導(dǎo)速度、復(fù)合肌肉動(dòng)作電位波幅以及末梢潛伏期均有不同程度恢復(fù)，但均未恢復(fù)至正常值。實(shí)驗(yàn)組MNCV、C

9、MAP波幅恢復(fù)比和末梢潛伏期延遲比均比對(duì)照組恢復(fù)得好(P＜0.05，t檢驗(yàn))。至第8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)傳導(dǎo)速度達(dá)到45.16±1.91m/s，而對(duì)照組神經(jīng)傳導(dǎo)速度僅達(dá)到32.60±3.57m/s;復(fù)合肌肉動(dòng)作電位波幅恢復(fù)比:實(shí)驗(yàn)組為83.89±1.94(％)，對(duì)照組為61.96±2.69(％);末梢潛伏期延遲比:實(shí)驗(yàn)組為1.30±0.06對(duì)照組為1.48±0.06。3組織學(xué)觀察。光鏡下觀察:與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組表現(xiàn)為有髓神經(jīng)纖維數(shù)目較多，

10、且較粗大的神經(jīng)纖維數(shù)量比例較高，髓鞘也較厚，變性的神經(jīng)纖維數(shù)目較少，結(jié)締組織增生較輕，血運(yùn)也較豐富。術(shù)后8周對(duì)照組變性的神經(jīng)纖維數(shù)目(28.6±1.4)與實(shí)驗(yàn)組(23.9±1.2)相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。電鏡下觀察:術(shù)后8周對(duì)照組可見再生的有髓神經(jīng)纖維較多，軸索較細(xì)，排列較規(guī)則，髓鞘增生不規(guī)則，厚薄不均，甚則變形、分層，部分髓鞘腫脹、溶合明顯，仍可見到髓鞘局限性塌陷和脫落現(xiàn)象，偶可見到線粒體髓樣化，結(jié)締組織增生仍比較明顯

11、;實(shí)驗(yàn)組表現(xiàn)為有髓纖維再生顯著，排列規(guī)則，呈束狀成長(zhǎng)，髓鞘明顯增厚，厚薄較一致，板層結(jié)構(gòu)較清晰，髓鞘輕度腫脹，未見到髓鞘塌陷、脫落現(xiàn)象，軸索直徑較大，結(jié)締組織增生不明顯，時(shí)可見到雪旺氏細(xì)胞、線粒體、微絲、微管等。4三頭肌濕重恢復(fù)率:術(shù)后各時(shí)間段，實(shí)驗(yàn)組三頭肌濕重恢復(fù)率均較對(duì)照組為好(P＜0.05，t檢驗(yàn))。至第8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組已達(dá)90.55±4.03(％)對(duì)照組僅為79.53±4.01(％)。
　　 結(jié)論:1羊膜軟組織填充材料應(yīng)用