KZNF家族中p53選擇性調控分子的篩選與功能的研究.pdf

1、腫瘤抑制蛋白p53是調控細胞周期進展及細胞凋亡發(fā)生的蛋白網絡的節(jié)點分子,作為重要的轉錄因子,在不同類型細胞應激條件下,如DNA損傷、原癌基因激活、氧化應激等,p53迅速激活在細胞內積累,發(fā)揮周期阻滯或細胞凋亡的作用。一直以來,p53在不同的時間空間,如何感應不同的細胞刺激被精細的調控是研究者力圖解決的重要問題,尤其 p53選擇調控領域受到越來越多的關注。p53選擇調控分子如Hzf、hCAS/CSE1L、ASSP家族的鑒定與功能的研究,為

2、闡明p53發(fā)揮特異調控機制提供了新的機制。
　　本課題組鑒定了一種p53新的負調控分子,Apak（ATM and p53 associated KRAB-containingzinc finger protein,也稱ZNF420),能夠選擇性的下調p53凋亡相關靶基因的表達,抑制p53介導的細胞凋亡,而對細胞周期阻滯及其它p53參與生理功能沒有調控作用。Apak通過與其轉錄抑制輔助因子KAP-1（KRAB-associated

3、protein-1)相互作用,募集 ATM（ataxia-telangiectasia mutated protein)、HDAC1(histone deacetylase1)形成作用復合體,共同發(fā)揮對p53的調控功能。Apak屬于KRAB型鋅指蛋白(KRAB-containingzinc finger protein,KZNF),是哺乳動物中最大的轉錄因子/轉錄調控因子家族。此家族最大的特點是具有相似的結構與相同的功能機制,我們將尋找

4、 p53選擇性調控分子擴展到Apak所處的整個KRAB型鋅指蛋白家族。
　　我們首先調取了人類基因組存在的423種 KZNF基因,利用生物信息學方法分析具有一定潛在特征(如,類似Apak,氨基酸序列中含有典型的ATM磷酸化位點:SQ/TQ序列)一組的KZNF家族分子,進行克隆并確證其表達,檢測它們對p53轉錄活性的調節(jié)作用及與p53的結合能力,從而篩選出既抑制p53活性也可結合p53的成員,對這些成員檢測其對p53靶基因的選擇性調

5、控,最后對篩選出來的選擇調控性分子作功能的驗證。
　　我們鑒定出15個可抑制p53活性的分子,21個與p53相互作用成員,選取對p53抑制功能與p53結合能力一致的分子,共14個,分析其對p53靶基因的選擇性調控,從中我們篩選到 ZNF8可選擇性的調節(jié)血管生成靶基因 TSP1;ZNF498選擇性調節(jié)細胞凋亡相關靶基因Puma、p53AIP1。我們對篩選出來的分子ZNF8、ZNF498在分子和細胞學水平對其參與的p53相關生命過程作