流式微球技術(shù)檢測(cè)GPⅡb-Ⅲa自身抗體在ITP診斷中的臨床意義.pdf

1、研究背景：
　　原發(fā)免疫性血小板減少癥(Primary immune thrombocytopenia，ITP）是臨床上常見(jiàn)的出血性疾病，發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，目前認(rèn)為ITP是體液免疫和細(xì)胞免疫異常導(dǎo)致血小板破壞增多、生成減少而最終以外周血血小板減少、皮膚黏膜出血為特征的疾病。目前，ITP仍為排除性診斷，尚無(wú)可供應(yīng)用的“金標(biāo)準(zhǔn)”，需要排除自身免疫性疾病和其他原因所致繼發(fā)性血小板減少之后才能診斷ITP。因此非常需要一個(gè)特異性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)

2、室診斷指標(biāo)，以進(jìn)一步確定臨床診斷，并能鑒別免疫性與非免疫性血小板減少。目前主要研究血小板特異性抗體一血小板膜表面糖蛋白（GP）抗體，血小板特異性自身抗體通常是針對(duì)血小板膜GPⅡb/Ⅱa或GPIb/Ⅸ[3]，針對(duì)血小板表面膜GP特異性自身抗體的檢測(cè)方法主要有單克隆抗體俘獲血小板抗原技術(shù)（MAIPA）,放射免疫微球技術(shù)等,這些方法特異性較高,約為78％一93%,對(duì)于鑒別 ITP與非免疫性血小板減少有一定價(jià)值,但敏感性偏低,為49%一66%。

3、因這些方法實(shí)驗(yàn)室要求高，且操作繁瑣,耗時(shí)長(zhǎng),難以在臨床廣泛開(kāi)展[5]。流式微球技術(shù)（Cytometric Bead Array，CBA）是基于流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù)，它以聚苯乙烯微球?yàn)榉磻?yīng)界面，利用特異性單克隆抗體包被后即可俘獲一些小分子物質(zhì)，通過(guò)檢測(cè)微球的“放大”作用對(duì)一些小分子物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者將CBA應(yīng)用于血小板膜表面GP自身抗體的檢測(cè)，其對(duì)ITP診斷的特異性和敏感性均較高,且其耗時(shí)短，重復(fù)性好。
　　目的

4、：
　　應(yīng)用流式微球技術(shù)檢測(cè)血小板GPIIb/IIIa自身抗體，以探討其在ITP中的診斷價(jià)值。
　　方法：
　　選取石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院就診的ITP患者、非免疫性血小板減少癥患者及健康體檢者，抽取外周靜脈血，應(yīng)用流式微球技術(shù)檢測(cè)血小板GPⅡb/Ⅱa自身抗體，記錄各個(gè)樣本的平均熒光強(qiáng)度（MFI），計(jì)算樣本的MFI與正常對(duì)照（三個(gè)不同正常人血樣）MFI均值的比率。同時(shí)對(duì)所選樣本抽取外周血進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)。

5、r>　　結(jié)果：
　　1.ITP組、非免疫性血小板減少組和正常對(duì)照組的MFI比率分別為（2.61±1.09）、（1.32±0.59）和（0.95±0.40），非參數(shù)檢驗(yàn)得ITP組MFI比率高于非免疫性血小板減少組和正常對(duì)照組（P值均小于0.01），而后兩者M(jìn)FI比率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.如果將正常對(duì)照組的上限設(shè)為界值,比率大于1.93視為陽(yáng)性,則流式微球技術(shù)對(duì)ITP診斷的敏感性為71.88%,特異性為84

6、.62%,由ROC曲線得流式微球技術(shù)區(qū)分ITP患者與非免疫性血小板減少患者的能力(鑒別效度)為0.848。
　　3.T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)中，ITP組CD3+ T淋巴細(xì)胞百分比（63.81±8.23）%、CD4+T淋巴細(xì)胞百分比（32.89±7.24）%、CD4+/CD8+比值（1.32±0.48）均低于健康對(duì)照組[（70.86±10.16）%、（41.39±6.41）%、（1.98±0.41）]（P<0.05），而CD8+T淋巴細(xì)胞