長鏈非編碼RNA MALAT-1在腫瘤細胞中的表達調(diào)控及作用機制研究.pdf

1、StudiesontheregulationofMALAT1’SexpressionanditsroleincancercelllinesAThesisSubmiRedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofScienceBYWangQiweiSupervisedbyLiShufengAssociateProfessorInstituteofLifeScienceSouthe

2、astUniversityMay2014中文摘要長鏈非編碼RNAMALAT1在腫瘤細胞中的表達調(diào)控及作用機制研究中文摘要目的：肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本(metastasisassociatedlungadenocarcinomatranscriptl，MALAT1)是一種長鏈非編碼RNA(iongnon—codingRNA，IncRNA)。MALAlTl在多種腫瘤中呈過表達，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移程度呈正相關(guān)，是一種被廣泛認可的腫瘤診斷、分期、預后

3、的生物標志物。然而到目前為止，關(guān)于MALATI在腫瘤中高表達的機制尚未有人報道。本研究將以多種腫瘤細胞為模型(以肺癌細胞系為主)進行研究，以期闡明MALAT1在人腫瘤細胞中的表達調(diào)控機制，并初步分析MALAT1在腫瘤中的作用機制。方法：(1)研究轉(zhuǎn)錄因子SPI對MALAT1的調(diào)控作用：用熒光素酶報告系統(tǒng)確定具有足夠活性的MALATI核心啟動子區(qū)域，并用生物信息學預測這一區(qū)域內(nèi)可能存在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點；驗證轉(zhuǎn)錄因子SPI與核心啟動子區(qū)域

4、內(nèi)潛在的SPl結(jié)合位點的相關(guān)性，并通過凝膠遷移率實驗(EMSA)和染色質(zhì)免疫共沉淀實驗(ehIP)證明SPI與這一區(qū)域的直接結(jié)合作用；siRNA干擾SPI的表達，檢測MALAT1的表達是否會隨著轉(zhuǎn)錄因子表達的下調(diào)而得到抑制。(2)研究下調(diào)MALAT1的表達對腫瘤細胞轉(zhuǎn)移能力的影響：siRNA干擾MALAT1的表達，驗證MALATI的下調(diào)是否會抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移能力：siRNA干擾轉(zhuǎn)錄因子SPl的表達，驗證SPl的下調(diào)是否能夠通過下調(diào)MALA

5、TI的表達來達到抑制腫瘤的目的。(3)研究MALATI調(diào)節(jié)SPI表達的作用方式：WesternBlot檢測過表達MALATI的靶蛋白PSF對癌基因SPl表達的影響，并通過chIP證明PSF與SPI的調(diào)控區(qū)域的直接結(jié)合；WesternBlot檢測過表達MALAT1是否能夠促進SPI的表達，并通過RNA免疫共沉淀實驗(RIP)驗證PSF與MALAT1在體內(nèi)的結(jié)合。結(jié)果：生物信息學分析顯示MALA1的近端啟動子區(qū)域含有多個轉(zhuǎn)錄因子SPl的潛在