應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測不同來源淋巴瘤細胞株及正常淋巴細胞的差異蛋白表達.pdf

1、目的：淋巴瘤是血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病機制尚不清楚，診斷上以組織活檢作為確診標準，而淋巴瘤早期小病灶或位于體內(nèi)的深部病灶組織活檢檢出率較低，給臨床診斷帶來困難。目前其基本治療策略是以化療為主的化、放療結(jié)合的綜合治療。我們應(yīng)用SELDI—TOF—MS技術(shù)對體外培養(yǎng)的人T、B淋巴瘤細胞株和正常淋巴細胞的蛋白進行檢測，通過Proteinchip software收集數(shù)據(jù)，并應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行分析，以尋找淋巴瘤

2、細胞和正常淋巴細胞的差異蛋白及不同來源淋巴瘤細胞間的差異蛋白。體外培養(yǎng)的細胞株雖然不能完全反映體內(nèi)細胞的生長狀態(tài)和生物學(xué)活性，但它具有成分單一、均質(zhì)性好、實驗條件容易控制等優(yōu)點，通過實驗期望為尋找淋巴瘤的分子標志物并進而為研究淋巴瘤的發(fā)病機制和尋找治療靶位打下初步基礎(chǔ)，并為其早期診斷提供幫助。 方法：常規(guī)培養(yǎng)人T、B淋巴瘤細胞株于含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基的25ml培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱

3、中培養(yǎng)，每3～5天傳代一次，取對數(shù)生長期的細胞作實驗，將兩種細胞分別接種于6孔培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)，于接種2、4、6天后分別收集細胞，每個時間段設(shè)3個復(fù)孔，并使用淋巴細胞分離液從正常人外周血中分離出淋巴細胞接種子6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中另加入100ug/ml的植物血凝素，同樣于接種2、4、6天后分別收集細胞，每個時間段設(shè)3個復(fù)孔，使用蛋白提取液分別提取各孔細胞的總蛋白，并在收集細胞前各取少許淋巴

4、瘤細胞培養(yǎng)液上質(zhì)譜檢測，應(yīng)用表面增強激光解吸—離子化—飛行時間質(zhì)譜技術(shù)進行檢測，用CM10芯片獲得蛋白表達指紋圖譜，并通過Proteinchip software收集數(shù)據(jù)，實驗重復(fù)三次，得到的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計軟件包進行初步的統(tǒng)計學(xué)分析（計算均值X、標準差S和P值），P<0．05被認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：1．T淋巴瘤細胞株與正常淋巴細胞比較有6個差異表達蛋白質(zhì)荷比峰（P<0．05），有5個蛋白質(zhì)峰在T淋巴瘤細胞株

5、中高表達，1個蛋白質(zhì)峰低表達。2．B淋巴瘤細胞株與正常淋巴細胞比較有6個差異表達蛋白質(zhì)荷比峰（P<0．05），有4個蛋白質(zhì)峰在B淋巴瘤細胞株中高表達，2個蛋白質(zhì)峰低表達。3．T淋巴瘤細胞株和B淋巴瘤細胞株有共同的相對于正常淋巴細胞高表達和低表達的蛋白質(zhì)荷比峰。4．不同培養(yǎng)時間T淋巴瘤細胞株的蛋白表達無顯著差異（培養(yǎng)時間較短時）。5．不同培養(yǎng)時間B淋巴瘤細胞株的蛋白表達無顯著差異（培養(yǎng)時間較短時）。6．T淋巴瘤細胞株與B淋巴瘤細胞株比較有

6、7個差異表達蛋白質(zhì)荷比峰（P<0．05），相對于B淋巴瘤細胞株而言，有3個蛋白質(zhì)峰在T淋巴瘤細胞株中高表達，4個蛋白質(zhì)峰低表達。 結(jié)論：1．T、B淋巴瘤細胞與正常淋巴細胞比較蛋白質(zhì)組學(xué)水平均有顯著差異。 2．T、B淋巴瘤細胞間的蛋白質(zhì)組學(xué)水平有顯著差異。 3．同種的淋巴瘤細胞株在不同培養(yǎng)時間的蛋白質(zhì)組學(xué)水平無顯著差異（培養(yǎng)時間較短時）。 4．應(yīng)用SELDI—TOF—MS技術(shù)可能對篩選淋巴瘤的分子標志物有重