應(yīng)用SELDI-TOF-MS診斷早期食管癌的研究.pdf

1、研究背景與目的:我國是食管癌的高發(fā)區(qū),發(fā)病年齡多在40歲以上。食管癌是我國重要的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,死亡率在惡性腫瘤中居于前列。食管癌綜合治療的效果目前仍不理想。術(shù)后5年生存率低于30％。然而早期食管癌幾乎可以完全治愈,有資料顯示術(shù)后5年生存率高達(dá)90％。因此,食管癌的早期診斷,對于改善患者的預(yù)后具有極其重要的意義。然而,現(xiàn)有的診斷技術(shù)和方法,在食管癌的早期診斷方面均不能令人滿意。類似于吞咽輕度哽噎感、胸骨后悶脹不適等早期癥狀并不典型。拉

2、網(wǎng)細(xì)胞學(xué)檢查是在高發(fā)區(qū)大面積普查的一項有效方法,并可應(yīng)用于臨床診斷,早期癌的發(fā)現(xiàn)率可達(dá)80％～91％。但病人自覺痛苦,難以接受。內(nèi)鏡檢查、X線鋇餐造影檢查、放射性同位素檢查以及CT、MRI、PET(正電子發(fā)射斷層顯像)、EUS(食管內(nèi)窺鏡超聲檢查)、腫瘤標(biāo)志物檢測等各有優(yōu)缺點。但總體來說,效果并不理想。往往發(fā)現(xiàn)時,患者已屆中晚期,預(yù)后及生活質(zhì)量不佳。因此,尋找一種高度敏感、特異的診斷早期食管癌的方法成為目前臨床的迫切需要。差異蛋白質(zhì)組學(xué)

3、的發(fā)展為腫瘤的研究提供了新的思維方式。腫瘤細(xì)胞的病理發(fā)展過程中,必然會產(chǎn)生和正常人不一樣的蛋白質(zhì)組,如果能將這種蛋白質(zhì)組的差別正確地進(jìn)行分析,勢必能夠?qū)ふ业揭环N新的診斷腫瘤的方法。表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)技術(shù)是近年發(fā)展起來的一種蛋白組學(xué)研究方法。以這一技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的蛋白質(zhì)芯片可以非特異性或特異性地結(jié)合被測樣本中的各種蛋白質(zhì),當(dāng)在質(zhì)譜儀中受激光轟擊時,各種結(jié)合的蛋白質(zhì)會被激發(fā)而形成氣化離子,由于不同質(zhì)

4、荷比的離子在電場中飛行時間長短不一,因此接收裝置可根據(jù)蛋白質(zhì)質(zhì)荷比的不同及量的多寡直觀地用位置、強(qiáng)弱不周的峰表現(xiàn)出來,進(jìn)而形成圖譜來分析。利用這種技術(shù)可對血清、尿液、細(xì)胞裂解液等生物樣品直接進(jìn)行檢測,且具有高靈敏度及高通量性的特點,能基本反映被檢樣本中蛋白質(zhì)的全貌,進(jìn)而同時找到多個蛋白質(zhì)標(biāo)志物,為早期診斷、預(yù)后估計、復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的監(jiān)測提供了可能。本研究旨在利用Ciphergen公司的蛋白質(zhì)芯片飛行時間質(zhì)譜儀系統(tǒng),選擇銅離子蛋白芯片,對早期

5、食管鱗癌和正常人血清差異表達(dá)蛋白進(jìn)行分析,探討建立可用于診斷早期食管癌的分類模型。 方法:采用美國Ciphergen公司的IMAC30芯片和表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時間質(zhì)譜儀,檢測51例早期食管癌和56例正常人的血清蛋白質(zhì)譜。將獲得的蛋白質(zhì)譜采用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern軟件分析。通過交叉驗證建立起診斷早期食管癌的分類樹模型,并另將含有56例正常人、43例早期食管

6、癌、22例食管良性病、23例癌前疾病以及54例中晚期食管癌的驗證組共198例對此模型進(jìn)行盲法驗證。 結(jié)果:對51例早期食管癌患者和56例正常人血清蛋白進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有25個蛋白表達(dá)量存在統(tǒng)計學(xué)差異,且此25個差異蛋白在早期食管癌患者血清中含量均低于正常人；通過Biomarker Pattern軟件進(jìn)行分析組合,以其中5個蛋白(質(zhì)荷比分別為4616.05、6336.80、7769.85、6113.94、15121.1)組成了

7、最佳分類樹模型,分組正確率達(dá)到98.04％,特異性為100％。將包括早期食管癌43例、食管息肉22例、癌前疾病23例、中晚期食管癌54例、正常人56例的驗證組對此模型進(jìn)行盲法驗證。結(jié)果該模型分類早期食管癌的敏感性為83.72％、特異性為96.04％。對于正常人、食管息肉、癌前疾病、中晚期食管癌各組的特異性分別為100％、86.36％、95.65％、88.89％。 結(jié)論:早期食管癌患者與正常人血清中有25個蛋白含量差異顯著。且早期