CBP基因在肺癌中的表達(dá)及其轉(zhuǎn)染對(duì)肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞體外生長(zhǎng)的抑制作用.pdf

1、Src羧基末端激酶結(jié)合蛋白(csk-binding protein，CBP)是2000年發(fā)現(xiàn)報(bào)道的新基因，目前認(rèn)為CBP通過(guò)對(duì)Src家族成員激酶活性的負(fù)反饋調(diào)節(jié)以及對(duì)免疫細(xì)胞激活過(guò)程的負(fù)調(diào)節(jié)和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)聯(lián)。CBP的發(fā)現(xiàn)，為Src激酶家族在細(xì)胞中的正確定位提供了良好的解釋?zhuān)瑸槟[瘤的分子機(jī)理研究提供了新的思路。目前關(guān)于CBP基因與人類(lèi)肺癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。 目的： 比較分析CBP基因mRNA和蛋

2、白在人肺癌組織中的表達(dá)情況，通過(guò)基因重組技術(shù)構(gòu)建CBP基因真核表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A-1，觀察重組表達(dá)載體對(duì)SPC-A-1細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。探尋CBP基因在肺腺癌SPC-A-1發(fā)生、發(fā)展中的作用，從而為肺腺癌機(jī)理研究和基因治療方面提供新的思路和理論依據(jù)。 方法： (1).RT-PCR及Western-blot方法檢測(cè)肺癌組織與對(duì)應(yīng)癌旁正常肺組織中CBP基因mRNA和蛋白的表達(dá)量，并探尋表達(dá)差異與臨

3、床病理的相關(guān)性。 (2).提取SPC-A-1細(xì)胞總RNA，根據(jù)人CBP基因序列設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用RT-PCR法擴(kuò)增目的片斷，通過(guò)雙酶切定向克隆的方法構(gòu)建CBP基因真核表達(dá)載體pcDNA3.0-CBP。 (3).應(yīng)用脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入SPC-A-1細(xì)胞，G418篩選陽(yáng)性克隆，PCR鑒定轉(zhuǎn)染結(jié)果。應(yīng)用RT-PCR及Western-blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞CBP基因mRNA和蛋白表達(dá)差

4、異。 (4).通過(guò)MTT比色、軟瓊脂集落形成、劃痕修復(fù)、Transwell細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和Transwell細(xì)胞侵襲等一系列細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株CBP的差異表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、粘附、運(yùn)動(dòng)和侵襲的影響。 結(jié)論： (1).與癌旁正常腫組織相比，人肺癌組織中CBP基因低表達(dá)。 (2).成功構(gòu)建了CBP基因的真核表達(dá)載體。 (3).應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功將CBP基因的真核表達(dá)載體導(dǎo)入SPC-A-1細(xì)