RNA干擾沉默Livin基因?qū)θ朔蜗侔┘?xì)胞株SPC-A-1裸鼠移植瘤生長的影響.pdf

1、背景：
　　 肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，近年來一些研究發(fā)現(xiàn)Livin在肺癌中表達(dá)增高，推測其可能參與了肺癌的發(fā)生及進展。本課題通過RNA干擾技術(shù)抑制Livin基因表達(dá)，觀察其對肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞增殖的影響，并在此基礎(chǔ)上進一步行體內(nèi)實驗，探討沉默Livin基因表達(dá)對肺腺癌裸鼠移植瘤生長的影響，觀察其能否成為肺癌基因治療的一個有效靶點。
　　 目的：
　　 利用RNA干擾技術(shù)沉默凋亡抑制蛋白基因Livin

2、基因在人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A-1中的表達(dá)，探討Livin表達(dá)沉默后對SPC-A-1裸鼠移植瘤生長的影響。
　　 方法：
　　 以慢病毒為載體，將攜帶針對Livin基因的短發(fā)夾RNA(Short hairpin RNA，shRNA)及無關(guān)序列片段的shRNA轉(zhuǎn)染SPC-A-1細(xì)胞，轉(zhuǎn)染成功后將慢病毒轉(zhuǎn)染Livin shRNA的SPC-A-1細(xì)胞(實驗組)、慢病毒轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的SPC-A-1細(xì)胞(陰性載體對照組)及未轉(zhuǎn)染任

3、何載體的SPC-A-1細(xì)胞(空白對照組)分別接種至裸鼠右腋皮下，構(gòu)建SPC-A-1裸鼠皮下移植瘤模型，觀察各組細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤時間、成瘤率、測量瘤體體積、瘤體重量，并繪制腫瘤生長曲線及計算抑瘤率；RT-PCR、免疫組織化學(xué)法分別檢測Livin基因及蛋白表達(dá)情況，原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)檢測移植瘤組織凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、與

4、空白對照、陰性載體對照組相比，實驗組裸鼠移植瘤成瘤時間晚，瘤體生長緩慢，體積抑瘤率達(dá)(59.5±3.4)％(P＜0.05)，瘤重也明顯減輕，瘤重抑瘤率達(dá)(71.1±5.6)％(P＜0.01)。
　　 2、實驗組Livinα mRNA表達(dá)水平為(37.2±1.6)％，Livinβ mRNA表達(dá)水平為(29.4±1.1)％，均明顯低于空白對照組及陰性載體對照組(P值均＜0.05)。
　　 3、實驗組Livin蛋白表達(dá)水平為(

5、15..3±2.8)％，明顯低于空白組(51.3±2.1)％和陰性載體對照組(52.5±2.5)％(P＜0.05)。
　　 4、實驗組瘤組織細(xì)胞凋亡明顯增多，凋亡率為(35.4±3.2)％，明顯高于空白組(5.4±1.3)％和陰性載體對照組(8.6±1.5)％(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 沉默SPC-A-1細(xì)胞中Livin基因表達(dá)能有效抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生長，并使移植瘤組織細(xì)胞凋亡增多，Livin有