流式細胞術(shù)和聚合酶鏈反應(yīng)檢測B細胞淋巴瘤骨髓侵犯及臨床意義的研究.pdf

1、B細胞淋巴瘤(B-celllymphoma)是起源于B淋巴細胞的惡性增生性疾病，屬于一類非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkinlymphoma，NHL)。臨床上主要表現(xiàn)為無痛性淋巴結(jié)腫大，和霍奇金淋巴瘤相比，更易發(fā)生于淋巴結(jié)外組織和器官；同時還可以伴有全身癥狀如發(fā)熱、盜汗及體重減輕等。根據(jù)20O年世界衛(wèi)生組織關(guān)于造血和淋巴系統(tǒng)腫瘤的新分類，B細胞惡性腫瘤可分為十余種，在各種類型的B細胞淋巴瘤中，臨床生物學(xué)行為具有較大差異，在B細胞淋巴瘤

2、的病程發(fā)展過程中，較易發(fā)生骨髓侵犯。對有骨髓侵犯的患者，AnnArbor分期則直接劃分為口期，在提示侵襲性淋巴瘤預(yù)后的IPI(InternationalPrognosticIndex，IPI)分級系統(tǒng)中，結(jié)外侵犯的多少作為一個重要的組成部分，對預(yù)后有明顯影響。判斷惡性淋巴瘤骨髓侵犯可以得到3方面的作用：(1)進一步確認和診斷疾?。?2)提供關(guān)于分期信息；(3)提供預(yù)后危險因素的判斷。骨髓活檢和骨髓穿刺是臨床常用于判斷骨髓侵犯的行之有效的

3、形態(tài)學(xué)方法，而流式細胞技術(shù)和分子生物學(xué)診斷技術(shù)的發(fā)展則為骨髓侵犯的判斷提供了新的發(fā)展方向，在國外，這兩種技術(shù)已經(jīng)在判斷B細胞淋巴瘤骨髓侵犯中得到了深入研究。本研究則主要著力于應(yīng)用新的技術(shù)在檢測中國人B細胞淋巴瘤骨髓侵犯中的地位和作用。本研究包括三個部分： 第一部分流式細胞術(shù)在B細胞淋巴瘤患者骨髓檢測中的應(yīng)用研究 目的：探討流式細胞術(shù)(FlowCytometry，F(xiàn)CM)在檢測B細胞淋巴瘤骨髓侵犯中的可行性及有效性，并初步

4、評價其臨床病理價值。 方法：采用CD45-SSC設(shè)門聯(lián)合三種不同熒光標記的抗CD45、CD5、CDl0、CDl9、CD20、CD22、CD23、CD43、FMC7、λ和k抗體在EPICS-XL(R)型流式細胞儀上對79例B細胞淋巴瘤患者骨髓進行檢測，與骨髓細胞形態(tài)檢測比較。 結(jié)果：(1)在79例B細胞淋巴瘤患者中，用FCM檢測出35例(44.3％)患者有侵犯，而骨髓細胞形態(tài)學(xué)只檢測出16例(20.3％)，兩者有顯著性差異

5、(P＜O.05)；符合率為60/79(75.9％)。(2)用FCM檢測，彌漫大B細胞性淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)及小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)患者在初診時的侵犯率分別為20.O％、43.8％和100％。(3)對未確定具體類型的4例骨髓侵犯患者，根據(jù)免疫表型能夠幫助診斷。(4)FCM特異性較好，在非淋巴細胞性白血病中未檢出異常，F(xiàn)CM檢測的靈敏度在15％。(5)FCM結(jié)果陽性率和累及器官、組織學(xué)類型、AnnArbor分期和

6、危險組別有明顯關(guān)系，在結(jié)內(nèi)和結(jié)內(nèi)外均有累及、惰性淋巴瘤、分期晚以及高-中危組的患者中FCM陽性機會高于相對應(yīng)的組別(P＜0.001)，有B組癥狀及復(fù)治的患者中FCM檢出骨髓侵犯高于相應(yīng)的組別，但未顯示統(tǒng)計學(xué)意義(P＞O.05)，與性別、年齡、LDH水平和脾臟侵犯與否無關(guān)(P＞0.05)。在初治患者中結(jié)果相似。(6)FCM是否陽性和患者治療后獲得完全緩解(completeresponse，CR)有明確關(guān)系，F(xiàn)CM陽性者獲得CR的機會低于陰

7、性者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但是在和短期生存的關(guān)系中未見FCM結(jié)果對其產(chǎn)生影響。 結(jié)論：FCM是檢測B細胞淋巴瘤骨髓侵犯的有效方法，較骨髓細胞形態(tài)學(xué)敏感；且能夠起到輔助診斷的作用；FCM檢測的靈敏度在15％左右，AnnArbor分期晚和惰性淋巴瘤患者中FCM陽性率高于分期早和侵襲性淋巴瘤患者；FCM陽性者治療后獲得CR機會低于陰性患者，對于生存的影響需延長隨訪時間進一步觀察。 第二部分聚合酶鏈反應(yīng)

8、檢測B細胞淋巴瘤骨髓 免疫球蛋白重鏈基因重排的研究 目的：探討聚合酶鏈反應(yīng)(Polymemsechainreaction，PCR)在檢測B細胞淋巴瘤骨髓侵犯中的可行性及有效性，并初步評價其臨床病理價值。 方法：采用半巢式PCR方法對105例B細胞淋巴瘤患者骨髓中免疫球蛋白重鏈(Immunoglobulinheavychain，IgH)基因的單克隆性重排進行檢測，與骨髓細胞形態(tài)檢測比較。 結(jié)果：(1)在10

9、5例B細胞淋巴瘤患者中，用PCR檢測出48例(45.7％)患者有侵犯，而骨髓細胞形態(tài)學(xué)只檢測出22例(21.O％)，兩者有顯著性差異(P＜O.05)；符合率為71.4％(75/105)。(2)用PCR檢測，彌漫大B細胞性淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)及小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)患者在初診時的侵犯率分別為30.8％、25.0％和l00％。(3)PCR檢測靈敏度較高，為2-4％。(5)PCR結(jié)果陽性率與AnnArbor分期有明

10、顯關(guān)系，在分期晚的患者中PCR陽性機會高于相對應(yīng)的組別(P=0.02)，在年齡大于等于60歲、男性、復(fù)治、LDH水平正常以及惰性淋巴瘤患者中高于相應(yīng)的年齡小于60歲、女性、初治、LDH水平升高以及侵襲性淋巴瘤患者，但未顯示統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，與累及器官、B組癥狀、脾臟侵犯與否無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。(6)PCR是否陽性和患者治療后獲得CR有明確關(guān)系，PCR陽性者獲得CR的機會低于陰性者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜O.05)，

11、但是在和短期生存的關(guān)系中未見PCR結(jié)果對其產(chǎn)生影響。 結(jié)論：PCR是檢測B細胞淋巴瘤骨髓侵犯的有效方法，較骨髓細胞形態(tài)學(xué)敏感；PCR檢測的靈敏度在2％-4％左右，AnnArbor分期晚患者中PCR陽性率高于分期早的患者；PCR陽性者治療后獲得CR機會低于陰性患者，對于生存的影響需延長隨訪時間進一步觀察。 第三部分骨髓細胞形態(tài)學(xué)、FCM免疫表型檢測和PCR檢測 基因重排在B細胞淋巴瘤骨髓侵犯檢測中的比較

12、 目的：比較骨髓細胞形態(tài)學(xué)、流式細胞術(shù)免疫表型檢測和聚合酶鏈反應(yīng)檢測IgH重排在判斷B細胞淋巴瘤骨髓侵犯中的診斷價值。 方法：采用骨髓穿刺細胞形態(tài)學(xué)、FCM和PCR對75例B細胞淋巴瘤患者骨髓同時進行檢測，并進行三者之間的比較。 結(jié)果：(1)骨穿檢出16例，陽性率2l.3％，F(xiàn)CM檢出36例，陽性率為48％，PCR檢出33例，陽性率為44％，三者之間的差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(2)三種檢測方法的符合率為

13、64％(48/75)，其中6例患者FCM陽性、形態(tài)學(xué)和PCR檢測均陰性，2例患者FCM和形態(tài)學(xué)檢測陽性、PCR檢測陰性，14例患者FCM檢測和PCR檢測陽性、形態(tài)學(xué)檢測陰性，5例患者PCR檢測陽性、FCM和形態(tài)學(xué)陰性。(3)FCM和PCR的符合率為82.7％(62/75)。 結(jié)論：FCM和PCR比骨髓細胞形態(tài)學(xué)的檢出率高，對后者是有益的補充，F(xiàn)CM和PCR的檢出對臨床具有參考價值，但需進一步觀察三種檢測方法不相符合患者的臨床表現(xiàn)