人β防御素3（hβD-3）的cDNA克隆與融合蛋白的表達(dá).pdf

1、該試驗(yàn)利用基因工程技術(shù),利用大腸桿菌獲得具有抗菌活性的重組hβD-3融合蛋白,為進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)hβD-3打下了基礎(chǔ).目的:擴(kuò)增編碼hβD-3成熟肽的cDNA,將其構(gòu)建于原核表達(dá)載體后利用大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá),最終獲得具有抗菌活性的hβD-3融合蛋白.結(jié)論：該試驗(yàn)利用RT-PCR技術(shù),通過(guò)使用所設(shè)計(jì)的針對(duì)hβD-3的特異引物,成功地自人扁桃體克隆了編碼hβD-3成熟肽的cDNA,并將其與表達(dá)運(yùn)載蛋白DHFR的基因一起成功地構(gòu)建于新型高效原核

2、表達(dá)載體pQE-80L,得到重組原核表達(dá)質(zhì)料pQE-80L/DHFR/hβD-3.同時(shí)構(gòu)建了重組對(duì)照質(zhì)粒pQE-80L/DHFR.上述質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化M15大腸桿菌,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)均分別表達(dá)了hβD-3融合蛋白和DHFR融合蛋白,大小分別為31kD和26kD.重組hβD-3融合蛋白的表達(dá)量達(dá)到了細(xì)菌表達(dá)蛋白總量的約40﹪.分離、提純和活化后的hβD-3融合蛋白表現(xiàn)出了對(duì)金黃色葡萄球菌等細(xì)菌的抗菌活性,而經(jīng)過(guò)同樣分離、提純和活化的DHFR融合